结核杆菌hsp16.3对巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究-effects of mycobacterium tuberculosis hsp 16.3 on macrophage apoptosis and its mechanism.docx
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结核杆菌hsp16.3对巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究-effects of mycobacterium tuberculosis hsp 16.3 on macrophage apoptosis and its mechanism
石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名:时间:年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名:时间:年月日导师签名:时间:年月日摘要目的:探讨结核杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法:1结核杆菌国际标准强毒株H37Rv(H37Rv)株、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗(BCG)和卡介苗菌株Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)感染巨噬细胞RAW264.7细胞株,利用激光共聚焦显微镜技术鉴定感染RAW264.7巨噬细胞模型。2于巨噬细胞感染后1h、3h、6h、12h,用流式细胞技术检测各组感染巨噬细胞的凋亡率,利用Western-Blot技术比较研究巨噬细胞内Caspase-3、Bcl-2表达水平的变化。结果:1MTB的毒力不同凋亡率存在差异,感染BCG组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组,感染△BCG组巨噬细胞凋亡率高于△H37Rv组。MTBHsp16.3基因缺失突变株感染巨噬细胞凋亡率高于正常菌株,感染△H37Rv组、△BCG组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组和BCG组。2H37Rv、BCG、△H37Rv和△BCG感染巨噬细胞均能诱导表达Caspase-3和Bcl-2。随时间延长,其诱导感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平亦相应增加,至感染第12h时达到高峰,且BCG组感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平始终高于H37Rv组,△BCG组感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平始终高于△H37Rv组;H37Rv组与△H37Rv组、BCG组△BCG组感染巨噬细胞表达Caspase-3的水平没有差异。随时间延长,BCG组与△BCG组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平相应增加,至感染第12h时达到最高,而H37Rv组与△H37Rv组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平有所降低,至感染第12h时达到最低;BCG组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平始终高于△BCG组,且在3h、6h、12h差异具有统计学意义,H37Rv组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平始终高于△H37Rv,且在1h、3h、6h差异具有统计学意义。结论:1感染巨噬细胞的凋亡率与菌株毒力强弱有关,毒力弱的MTB感染的巨噬细胞凋亡更显著。MTBHsp16.3可影响感染巨噬细胞凋亡率,敲除Hsp16.3基因的MTB比正常菌株诱导感染巨噬细胞凋亡水平高。2MTB感染巨噬细胞表达Caspase-3和Bcl-2水平与菌株毒力强弱有关。敲除Hsp16.3基因的MTB与正常菌株相比,诱导表达的Caspase-3和Bcl-2水平不同,可能与MTB能否产生Hsp16.3有关。3MTBHsp16.3可调控感染巨噬细胞的凋亡,而这种调控作用可能是通过促进Bcl-2蛋白的表达来实现的,与Caspase-3蛋白的表达无关。关键词:结核杆菌(MTB);Hsp16.3;巨噬细胞;凋亡;Caspase-3;Bcl-2研究类型:A(基础研究)AbstractObjective:StudyontheeffectandmechanismthatsmallheatshockproteinsHsp16.3ofMycobacteriumtuberculosisreactsattheapoptosisofmacrophages.Methods:Infectiousstatusofmacrophageswasobservedwithconfocallaserscanningmicroscopy(CLSM),whichwereinfectedbyinternationalstandardvirulentstrainofmycobacteriumtuberculosisH37Rvstrains(H37Rv)、lackofheatshockproteinsHsp16.3genedeletionstrainsofinternationalstandardvirulentstrainofmycobacteriumtuberculosisH37Rvstrai
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