结核杆菌hsp163与感染巨噬细胞凋亡的相关性研究-correlation between hsp 163 of mycobacterium tuberculosis and apoptosis of infected macrophages.docx

石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日目录中文摘要???????????????????????????????Ⅰ英文摘要???????????????????????????????Ⅱ英汉缩略语名词对照??????????????????????????Ⅲ前言?????????????????????????????????1第一部分：结核分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞模型的复制及鉴定研究1材料????????????????????????????????32方法????????????????????????????????53结果????????????????????????????????74讨论????????????????????????????????9第二部分：结核分枝杆菌Hsp16.3对细胞凋亡的影响及其机制的研究1材料????????????????????????????????112方法????????????????????????????????143结果????????????????????????????????174讨论????????????????????????????????23结论????????????????????????????????27参考文献???????????????????????????????28文献综述???????????????????????????????31致谢????????????????????????????????37作者简介???????????????????????????????38导师评语???????????????????????????????39摘要目的：结核分枝杆菌进入宿主巨噬细胞时诱导大量表达的Hsp16.3有助于结核分枝杆菌在宿主巨噬细胞内成为滞留菌，本实验通过建立结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞的模型，探讨研究结核分枝杆菌Hsp16.3与感染巨噬细胞凋亡的关系。方法：1.分别用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株感染巨噬细胞RAW264.7细胞株，于感染后1、3、6及12h，利用激光共聚焦显微镜鉴定卡介苗及结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株感染RAW264.7巨噬细胞模型。2.用流式细胞技术于上述各时间点检测各组感染巨噬细胞的凋亡率，并分析其时相性变化。利用PCR技术扩增模型目的基因，Western-Blot技术比较研究Hsp16.3于上述各时间点蛋白表达水平的时相性变化。结果：1.激光共聚焦显微镜下观察到RAW264.7巨噬细胞内有标记MTB16KD的绿色荧光，证实结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型构建成功。2.巨噬细胞感染结核分枝杆菌后，凋亡率升高,H37Rv组与BCG组感染巨噬细胞的凋亡率同一时间点比较，其中1h、3h、12h有统计学意义（P＜0.05）。3.巨噬细胞感染结核分枝杆菌后，PCR扩增产物在435bp处可见特异性条带，Hsp16.3蛋白表达升高，H37Rv组与BCG组Hsp16.3蛋白表达水平同一时间点比较，其中1h、3h有统计学意义（P＜0.05）。结论：1.成功建立了RAW264.7巨噬细胞的结核分枝杆菌感染模型。2.结核分枝杆菌感染可导致巨噬细胞凋亡，感染巨噬细胞的凋亡率与菌株毒力强弱有关，毒力弱的结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期凋亡更显著。3.不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞，诱导巨噬细胞凋亡水平的不同可能与它们诱导产生的Hsp16.3水平不同有关，毒力强的结核分枝杆菌感染巨噬细胞，感染巨噬细胞早期表达Hsp16.3更显著。4.结核分枝杆菌毒力的强弱、MTBHsp16.3被诱导表达水平均与宿主巨噬细胞的凋亡有关。关键词：结核分枝杆菌;H37Rv株;BCG;Hsp16.3;巨噬细胞论文类型：A（基础研究）AbstractObjecve:1.TheexpressionofMTBHsp16.3isusefulforMTBasdormancybacteriu