发酵工艺学课件第4章 菌种的选育和 与保藏.ppt

六、突变基因的表现 发酵产量决定于菌种遗传特性和菌种的培养条件，菌种遗传特性的改变，则其培养条件也相应改变。 高产菌株筛选出来以后，要进行最佳发酵条件的研究，使高产基因能在生产规模下得以表现。 第四节 杂交育种 杂交育种是指将两个基因型不同的菌株经接合使遗传物质重新组合，从中分离和筛选出具有新性状的菌株。 要求直接亲本菌株带有适当的遗传标记，如营养缺陷型、颜色和抗药性等。 杂交实际上是基因重组的过程，杂交育种也称之为重组育种。 基因重组 甲生长快、产量低 生长快、产量高 乙生长慢、产量高 　面包酵母:对麦芽糖及葡萄糖的发酵力强，产生CO2多，生长快； 酒精酵母:产酒率高而对麦芽糖、葡萄糖的发酵力弱. 杂交:就得到了既能生产酒精，又能将其残余菌体用作面包厂和家用发面酵母的优良菌种。 杂交育种的优点： 1、由于杂交育种选用了已知性状的供体菌和受体菌作为亲本。定向性强。 2、利用杂交育种往往还可以消除某一菌株在经过长期诱变处理后所出现的产量上升缓慢的现象。 一、细菌的杂交育种 转化：受体菌直接吸收了来自供体菌的DNA片段，通过交换把它整合到自己的基因组中，从而获得了新的遗传特性的现象。 转导：通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体为媒介，把供体细胞的DNA片段携带到受体细胞中，通过交换与整合，从而使后者获得前者部分遗传性状的现象，称为转导。 接合：指供体菌和受体菌完整细胞间的直接接触，而实现大段的DNA传递现象。 但成功的报道还不多。 接合：是细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（主要是质粒DNA）从供体菌转移给受体菌。能通过结合方式转移的质粒称为接合性质粒，不能通过性菌毛在细菌间转移的质粒为非接合性质粒。 二、放线菌的杂交育种 基因重组过程近似细菌，育种方法与霉菌相似. 放线菌的遗传体系和杂交原理： 异核现象：同一细胞（菌丝）含不同基因型的核。无重组体出现。 接合现象：发生部分染色体转移（交换），形成部分合子。整+部分、部分+部分。 异核系的形成：部分合子产生的无性繁殖系。能在基本或选择培养基上生长。 （单交换，二体区） 重组体的形成：异核系不稳定，可经过双交换形成重组子，产生重组子孢子。 2 放线菌的杂交技术 1)混合培养法：选择性平板法 [互补的营养缺陷型亲本] 亲本混合→接种完全培养基→单孢子悬液→选择平板分离→长出菌落即重组体 异核系分析法 混合培养→单孢子悬液→分离于基本培养基→小而丰富的菌落即异核系→异核系分离于完全培养基→长出的菌落即分离子 2)平板杂交法：孢子平板影印杂交 将菌落培养在非选择性培养基上，形成孢子后，用影印培养法将菌落印至铺有试验菌孢子(107～109个/mL)的CM平板上培养至孢子形成。把形成的孢子影印到一系列SM上—筛选各种重组体子代。 优点：能迅速地大量杂交，尤其是确定大量菌落与一个共同试验菌配对时的致育力更为方便。一个培养皿可排列20个菌株与一株配对菌株杂交。 平板杂交法 三、霉菌的杂交育种 有一类不产生有性孢子的丝状真菌，不经过减数分裂就能导致基因重组的生殖过程称为准性生殖。1952年Pontecorvo等在研究构巢曲霉时首先发现了准性生殖现象。 指真菌不通过有性生殖而进行基因重组的过程。 分为三个阶段： 1、异核体的形成 2、二倍体的形成 3、体细胞重组。 （一）准性生殖的3个阶段 1．异核体(heterocaryon)形成 用2个不同营养缺陷型突变株的混合孢子，大量接种到基本培养基表面，可得到少量原养型菌落，在这些菌落中的某一条菌丝或一个细胞内若同时具有两种或两种以上基因型的细胞核，则称为异核体。这种现象称为异核现象。 2．核融合(nuclear fusion)和杂合二倍体的形成 核融合是指异核体内2个不同基因型的单倍体细胞核在繁殖过程中融合成1个二倍体细胞核的过程（10-5-10-7的概率）。杂合二倍体是指细胞核中含有2个不同来源染色体组的菌体细胞。 菌丝成斑点、扇面——扇变。 3．体细胞交换(somatic crossing-over)与单倍体化 杂合二倍体极不稳定，在其进行有丝分裂过程中，有极少数细胞，其同源染色体的两条染色单体之间发生互换，在体细胞分裂时，产生1个或1个以上标记的纯合现象，从而形成具有新性状的单倍体杂合子。 单倍体化是指在一系列有丝分裂过程中一再发生的个别染色体减半，直至最后形成单倍体的过程。其单倍体化不是一次有丝分裂的结果，而是经过若干次有丝分裂过程，每次分裂都有可能从二倍体核中失去部分染色体，最后才回复成单倍体核。分裂次数取决于染色体数目，数目越多则其单倍体化所需要的分裂次数也越多。 （二）霉菌的杂交技术 1 遗传标记：营养缺陷型；抗药性突变等杂交亲本通常是经诱变得到的营