植物生物学实验课件显微技术知识及显微镜的使用方法.pptVIP

* * 显微镜技术 一、相关理论知识 二、目的要求 三、实验原理 四、试剂与器材 五、显微镜操作方法及 注意事项 六、实验结果 七、思考题 相关理论知识 显微镜的历史：最早的显微镜是荷兰的眼镜商詹森（Z.Jansen1588-1628）于1604年制造的。半个多世纪后，英国物理学家胡克（R.Hooke1663-1703）制造了第一台具有科学价值的显微镜，他首次观察到木栓的显微图象，发现了细胞。真正观察到活细胞的是荷兰科学家列文虎克（Antonie Van Leeuwenhoek1632-1723），他用自制的显微镜池塘中的原生动物、细菌等。 列文虎克1632年生于荷兰的代尔夫特 一生中制造了491架显微镜 1673年 发表文章，《列文虎克用自制的显微镜，观察皮肤、肉类以及蜜蜂和其他虫类的若干记录》。 列文·虎克的一生致力于在微观世界中探索，发表论文402篇，其中《列文·虎克发现的自然界的秘密》是人类关于微生物研究的最早专著。 一、显微镜的分类 1、可见光显微镜 利用光谱的可见光部 分（390-760nm）成 像的显微镜。 2、不可见光显微镜 可以分为紫外光显微 镜（390nm以下的紫 外光）、红外光显微 镜（760nm以上的红 外光）和X射线显微镜 等 体视显微镜 荧光倒置显微镜 倒置显微镜 生物显微镜 生物显微镜 生物显微镜 显微镜的光学系统 显微镜是精密的光学仪器，它的好坏主要取 决于光学系统，它由以下部件构成：目镜、物镜、聚光器及集光器、光源、滤光器 （1）目镜：a放大物镜映来的已放大的倒立的实像；b校正物镜余留下来的像差；c将物像投射到一定的位置上，便于显微放映或照相。 目镜的组成：一般由两块或两块以上的平凸透镜组合而成。上面与眼接触的叫接目透镜，下面的叫视野透镜。两者之间或视野透镜下面有一个金属圆环叫光阑。在光阑上可以安装目镜测微尺，有时可将毛发粘在光阑上做成指针。 目镜的放大倍数 每台显微镜装有不同放大倍数的目镜，常以5X、10X、15X等字样标明，目镜的放大倍数（M）可用下式计算： M=250mm（明视距离）/fmm（目镜焦距），其中明视距离指从眼睛晶状体到目镜所放大的虚象之间的距离，一般为250mm。显微镜的分辨力和镜像亮度有关系，而镜像亮度又与目镜放大倍数相关，即目镜放大倍数越高，镜像亮度越低。所以要达到相同的放大倍数如200倍，可采用10x的目镜与20x的物镜配合，也可采用20x的目镜和10x的物镜配合，但是提高分辨力最好选择前者。 （2）物镜：a放大微小的物体或微细的结构，形成倒立实像；b把像投射到目镜光阑处。 物镜的放大倍数：5x至20x为低倍镜，40x至80x为高倍镜，90x至100x为油镜。 物镜的放大倍数（W）：W=160mm（光学筒长）/fmm（物镜焦距），光学筒长是指物镜上、下焦点平面之间的距离，一般的为100mm，也有170mm长 物镜的数值孔径，又称镜口率，常用NxA或A表示。数值孔径越大吸光量越多，分辨力越高。NxA=nxsina/2（n是指物镜与标本之间介质的折射率；a指镜口角。 马铃薯淀粉颗粒4倍镜下观察图片 马铃薯淀粉颗粒10倍镜下观察图片 马铃薯淀粉颗粒40倍镜下观察图片 （3）聚光器及集光器 聚光器是由聚光镜、孔径光阑、滤光镜等组成。 用途：将光线集合成束，增加照明度，提高物镜分辨力。 集光器是由集光镜和视场光阑组成。 （4）光源 显微镜的照明光源有天然光源和人工光源两种。天然光源，即利用太阳光，最好是白云反射出来的光，一般不用直射光，必要的时候要加滤光片或毛玻璃，以免影响观察效果和损坏眼睛。人工光源，如显微镜灯，日光灯，台灯等。要求是光源强且稳定，最好强度能调节；发光的颜色要适宜，最好能近似天然白光；光源发热不能过多，尤其是活体观察要防止高温造成标本死亡，所以一般要放滤光片。 （5）滤光器 用显微镜观察标本或进行摄影时，往往要选择某一波段的光线，而排除不需要的光线；或者由于光线太强需要减弱；要达到这些目的就要在光源和聚光器之间安置适宜的滤光器。滤光器的种类有两种：滤光片和液体滤光器。最简单常用的是滤光片。滤光片根据制造方法的不同可分为有色玻璃滤光片、中性滤光片和干涉滤光片 显微镜的机械装置 显微镜的机械装置是有精密而牢固的零件组成，主要包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器和调焦装置等。 （1）镜座：又称镜脚是显微镜的基座，用以支持整个镜体的稳定。有的显微镜在镜座内有照明光源或反光镜。 （2）镜臂：支持镜筒、载物台、聚光器和调焦装置等。 （3）载物台：又称镜台或标本台，附着于镜臂下端上部的镜台附着器。台面与显微镜光轴垂直，它是支持被检物体的平面。台中央有一个通光孔。台上有标本夹，有的装