流感病毒rna聚合酶活性分析——一种比pb1抑制活性更强的小肽的鉴定-analysis of influenza virus rna polymerase activity - identification of a small peptide with stronger inhibitory activity than pb1.docxVIP

摘要摘要近些年来，高致病性的流感病毒肆虐全球，造成了严重人员死亡和大范围的 恐慌。在现有医疗水平和药物无法较好的预防和治疗由流感病毒引起的传染病的 条件下，研制出一种能够彻底抑制流感病毒的新药显得必要而且紧迫。研究表明，流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，其依赖于RNA 的RNA聚合酶由PA，PBI，PB2三个亚基组成，在病毒复制和转录中起着重要 作用。PBl N能够与PAc结合，抑制聚合酶的组装，从而阻止病毒的复制，是一 个良好的天然抑制剂。我们以结构已知的PBl N端16肽为基础，设计了一系列6肽和8肽以及突 变小肽，测定与PAc的结合强弱。通过表面等离子共振和热稳定性等实验，我 们得到了一些比PBlN结合力更强的小肽，并得到了其中一种小肽与PAc蛋白质复合物的2．8 A晶体，经过结构解析后可以非常清楚的看到小肽结合在PAc的活性部位。通过与文章报道的PAc与PBlN的复合物晶体结构相比，分辨率稍有提 高，结合力更强，从而为流感病毒RNA聚合酶的多肽抑制剂开发提供了新的思 路，有助于寻找真正抑制流感病毒的多肽药物。关键词：流感病毒RNA聚合酶，抑制剂，蛋白质晶体，表面等离子共振， 热稳定性实验，多肽药物设计AbstractAbs订actRecently highly pathogenic influenza strains cause the global pandemic．It is SO urgent that a new drug against the influenza A virus is needed,since the current therapeutics cannot provide a completely efficient protection．As reported，influenza A virus belong to Orthomyxoviridae，its RNA dependent RNA polymerase(RdRp)heterotrimer which contains PA，PB 1 and PB2，has crucial roles in Viral RNA replication and transcription．PB 1(residues 1-25)can binds to PA(residue 257-716)and blocks assembly of the RNA polymerase replication,whichshows a 900d inhibitory activity．In base of PB 1 N，we designed a series of peptides，calculated the binding activitywith PAc．After using the Surface Plasmon Resonance and Thermal Shift Assay methods，we found some peptides which revealed a stronger than PB 1 N，got a co-crystal of a peptide with PAc．We solved a 2．8A structure of PAc in complex with the peptide．Compared with the structure as repored before，this structure showed a higher resolution and a stronger binding activity with PAc．Since the heterotrimer islli鲥y conserved in the influenza strains，the results presented here indicate apromising way for peptide drug design against the influenza virus．Keywords：RNA polymerase，inhibitor,protein crystal，Surface PlasmonResonance，Thermal Shift Assay,peptide drug designII第一章流感病毒RNA聚合酶研究背景介绍第一章流感病毒RNA聚合酶研究背景介绍第一节流感病毒RNA聚合酶介绍1．1．1流感病毒结构介绍自从18世纪流感病毒在欧洲爆发以来，200多年的历史中，流感病毒带来 的灾难是巨大的，即便是现在，每年仍然有250，000人死于流感【l】。进入新世纪 以后，我国就爆