壳聚糖纳米载体对神经系统影响的研究论文-research paper on the influence of chitosan nanocarrier on nervous system.docxVIP

研究生优秀毕业论文浙江大学硕士学位论文致谢致谢时光匆匆，不曾想毕业竟已来临，短短三年，潮落潮起，舍不得的太多，要感谢的太多。首先，衷心感谢我的导师高建青教授，感谢您为我打开了科研的大门，深深折服于您渊博的学识、严谨的治学作风、严格的自我要求、独特的人格魅力，感谢您三年来对我的培养，感谢您在我迷惘时给予的关心与指导，从您身上学到了很多，毕生受用。特别感谢胡瑜兰老师在课题的设计、实验到论文撰写给予的无私帮助。三年时光，给你添了不少麻烦，感谢你在科研上对我的指导与包容，感谢你在生活上给予我大姐姐般的照顾。感谢姚醒蕾副研究员在我与科研的初次触电时给予的指导，你严谨的治学态度让我印象深刻。在课题的研究中，还得到了韩曼老师、彭丽华老9币、应晓英老师的指导与帮助，深表谢意。感谢药学院马丽老师，医学院朱有法老师，农学院王华老师、黎军英老师，特别感谢浙江工业大学傅正伟老师、彭涛师兄在斑马鱼行为学实验中提供的无私帮助。时光如白驹过隙，又恰似流雨烟云，相处的三年转眼即逝，带不走的回忆太多，感谢同门师兄弟姐妹，李旎、陈煜哲、张添源、陈希、吕清、黄冰、阮桂鑫、唐鑫江、李黎明、单颖慧、魏巍、孟庆华、宋臻珍、陈芝兰、姚梦竹、吴海滨、王萌、李颖、刘惠娜、蒋心驰、王霞蓉、皇甫铭一、牛杰、杜涵辉、吴佳禾、高思倩，感谢你们的陪伴和帮助。年少轻狂，抱怨、无理取闹都丢给了你们，却难道一声谢谢，感谢你们对女儿的理解与支持。潮落时给我安慰，潮起时陪我看风景，感谢你的包容与鼓励。最后感谢这段时光，曾经对自己的怀疑，曾经对未来的迷茫，到这时都变成最宝贵的财富。感谢这段时光让我变得坚强、独立、自信，经历过才明白这就是T万方数据浙江大学硕士学位论文致谢成长。心上一句敢，面对我的梦，甘愿做憨人!感谢一路走来的老师、朋友，谢谢你们的关心、帮助和支持。II万方数据浙江大学硕士学位论文摘要壳聚糖纳米载体对神经系统影响的研究浙江大学药学院药剂学硕士研究生袁忠月导师高建青摘要背景：目前关于无机纳米粒的毒性研究很多，而关于有机可降解纳米载体的毒性研究很少。壳聚糖纳米粒作为载体在脑部疾病治疗中应用广泛，并且常用吐温80修饰用于促进脑部递药，然而罕有关于其安全性的研究。本研究对壳聚糖纳米粒、吐温80修饰壳聚糖纳米粒对神经系统的影响进行了研究。方法：1．通过离子凝胶化法制备壳聚糖纳米粒(CS-NPs)、吐温80修饰壳聚糖纳米粒(TmCS姗s)，并对其粒径、电位、形态进行了表征；2．在SD大鼠上评价两种纳米粒的神经毒性，首先采用罗丹明B异硫氰酸酯(RBITC)对壳聚糖进行荧光标记，制备荧光标记的CS-NPs、TmCS-NPs，观察荧光标记的纳米粒在大鼠脑部分布，而后连续七天尾静脉注射高(30mg／kg)、中(10mg／kg)、低(3mg／kg)剂量纳米混悬液，并对主要聚集脑区的氧化应激标志物水平、组织病理学变化及GFAP、NeuN的表达进行了检测，此外，还对大鼠体重变化情况进行统计；3．在斑马鱼胚胎模型上评价CS-NPs、TmCS．NPs的发育神经毒性，首先将胚胎暴露于一系列浓度梯度(Smg／L，10mg／L，20mg／L，30mg／L，40mg／L，50mg／L)CS-NPs、TmCS-NPs混悬液，统计各组胚胎死亡率、孵化率及畸形发生情况，并计算两种纳米粒的LC50，以1／2LC50作为暴毒浓度对CS-NPs、TmCS-NPs暴露后胚胎神经行为及相关机制进行研究，神经行为评价指标包括19～27hpf胚胎自主运动、72hpf幼鱼机械触碰逃避反应、120hpf幼鱼自由游泳活力及光暗周期反应活力测定，机制研究包括胚胎活性氧检测、流式细胞术测定凋亡、吖啶橙染色评价凋亡、苏木精．伊红染色、透射电镜观察幼鱼肌肉形态、整体胚胎免疫组化染色评价初级运动神经元和次级运动神经元轴突的发育。III万方数据浙江大学硕士学位论文摘要结果t离子凝胶化法制备的CS加s、TmCS-NPs平均粒径分别为2474-20nm、2514-15nm，制备的纳米粒粒径均一，形态圆整，zeta电位分别为24．44-3．9mV、26．54-4．2mV。利用RBITC对壳聚糖进行荧光标记，本研究观察了250nm左右CS-NPs、TmCS-NPs在大鼠体内分布情况，检测到TmCS-NPs在脑部的荧光信号，而未检测到CS-NPs在脑部的荧光信号，250nm左右TmCS-NPs主要分布在大鼠的大脑皮层和小脑。连续七天尾静脉注射TmCS-NPs后，大脑皮层、小脑的氧化应激反应均不明显，但与空白对照组相比，大鼠体重降低明显，且呈剂量依赖。此外，TmCS-NPs处理后，皮层局部区域神经细胞形态变为梭形，且随着TmCS-NPs注射剂量的增高，神经细胞形态变化越明显。TmCS-NPs暴露还导致小脑GFAP表达降低。这些现象都表明TmCS-NPs具有潜在神经毒性。