蜡梅[chimonanthus praecoxl.link]cptaf9和cptaf10基因功能的初步分析-preliminary analysis of gene functions of chimonanthus praecox.link cp taf 9 and cp taf 10.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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蜡梅[chimonanthus praecoxl.link]cptaf9和cptaf10基因功能的初步分析-preliminary analysis of gene functions of chimonanthus praecox.link cp taf 9 and cp taf 10

研究生优秀毕业论文西南大学硕士学位论文4．1．5常用培养基一224．2实验方法．224．2．1植物表达载体的构建．．224．2．2转化拟南芥一284．2-3转基因拟南芥的检测．．294．2．4转基因拟南芥的功能分析．．304．3结果与分析．314．3．1植物表达载体的构建．．314-3．2转基因拟南芥的筛选．．324．3．3转基因拟南芥的检测334．3．4转cpr”9基因对拟南芥抗逆性的影响344．4讨论．40第5章蜡梅oTAFIO基因转化拟南芥及其功能分析．435．1实验材料．435．1．1植物材料．．435．1．2菌株与载体．．435．1．3主要仪器及生化试剂．．435．1．4自配溶液．．435．1．5常用培养基．．435．2实验方法．435．2．1农杆菌转化子的检测．．435．2．2转化拟南芥一435．2．3转基因拟南芥检测．．435．2．4转基因拟南芥的功能分析一445．3结果与分析．445．3．1农杆菌转化予的检测．．445．3．2转基因植株的检测．．455．3．3转CprAFlO基因对拟南芥抗逆性的影响．475．4讨论．50第6章总结．．536．1CpTAF9基因与其编码蛋白的生物信息学分析536．2实时荧光定量分析CpTAF9基因转录水平变化．．536．3转cprⅫ9基因和CpraFlO基因对拟南芥抗逆性的影响．．536．4下一步计划．53参考文献55至筻谢．63在校期间发表的论文及参加的项目652万方数据摘要蜡梅印7AF9和印TAFIO基因功能的初步分析花卉学硕士研究生杨建峰指导教师眭顺照教授李名扬教授摘要转录因子(transcriptionfactor,TF)又称反式作用因子，是能够与真核生物启动子区域中的顺式作用元件发生特异性相互作用的DNA结合蛋白。TAFs(TATAbox-bindingproteinassociatedfactors)即TATA框结合蛋白相关因子，是一类真核生物TATA结合蛋白(TBP)的联结因子。TAF9与TAFl0都是TAFs家族成员。本论文以实验室已克隆得到的CpTAF9基因全长为基础。对CpTAF9蛋白进行了生物信息学分析，并构建过表达载体转入野生拟南芥中，对转基因拟南芥进行盐胁迫和高温胁迫，以期对其功能得到初步分析。将已构建好的印TAFIO基因的过表达载体转入野生型拟南芥中，对转基因拟南芥进行盐胁迫，对其功能进行初步分析。主要研究结果如下：1CpTAF9基因及其编码蛋白的生物信息学分析CpTAF9基因全长870bp，其中有603bp的开放阅读框，编码一个含134个氨基酸残基的蛋白，不含内含子。多序列比对结果显示CpTAF9与各同源蛋白的序列一致性较高，聚类分析显示CpTAF9蛋白与黄瓜的同源蛋白聚在同一个分枝。2蜡梅CpTAF9基因转录水平的实时荧光定量分析实时荧光定量分析结果显示，转录产物在成熟叶中表达量最多，其次是幼叶，且两者之间的差异也较大，说明该基因的表达存在发育阶段特异性。推测该基因与叶形态建成相关。叶片中CpTAF9基因的表达量在不同非生物胁迫下的变化各不相同，在受到高温或盐胁迫时，其表达量显著上调，说明该基因可能在组织发育及胁迫响应过程中发挥着一定作用。3CpTAF9基因和CpzAFIO基因在拟南芥中的过表达分析构建植物表达载体pCAMBIA2301g—CpTAF9，通过农杆菌介导法转化拟南芥，对侵染后得到的拟南芥种子进行抗性筛选，在得到T2代转基因植株后进行GUS染色及荧光定量分析，共得到了5株转基因植株。对oTAF9转基因植株种子萌发和幼苗生长进行盐胁迫后发现转基因植株的耐盐胁迫能力较野生型拟南芥强；对转基因植株进行高温胁迫后发现转基因植株万方数据西南大学硕士学位论文的耐高温胁迫能力较野生型拟南芥强，初步判定CpTAF9基因与耐盐性和耐高温性相关。对CpTAFIO转基因植株种子萌发和幼苗生长进行盐胁迫后发现转基因拟南芥的盐胁迫耐性较强，初步判定CpTAFIO与耐盐性相关。关键词：转录因子；荧光定量；过量表达；功能分析万方数据Candidate：Jian-·fengYangAdvisor：ProfessorShun-zhaoSuiProfessorMing-—yangLiMajor：FloricultureCollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture，SouthwestUniversity,Chongqing400715．ChinaABSTRACTTranscriptionfactorwhichnamedtrans-actingfactor,istheDNA—bindingproteinwhichspecificallyinteractedwithcis·actingelementsinthepromoterreg