第10章维生素的测定 食品检验和 与分析 .pptVIP

⑵ 紫外分光光度法 a. 原理：VA为脂溶性的，测定VA时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱层析除去杂质等干扰物质，在紫外328nm下测定，求出含量。 b. 测定方法 1） 提取及皂化 :称样10.00g → 于烧杯中 → 加40ml水搅匀 → 移250ml分液漏斗中 → 加氨水5ml → 加乙醇35ml → 摇匀 → 用乙醚抽提（每次40ml抽提三次） → 收集乙醚层 → 用10ml水洗乙醚层三次 →水层再用30ml乙醚抽提一次 → 合并所用乙醚 → 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除尽后 → 加30ml80%的KOH → 40mlC2H5OH →加0.8g焦性没食子酸 → 83℃水浴30分钟（皂化脂肪）→ 冷却后移入250ml分液漏斗中 → 加60ml水 → 用40ml乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 → 用水洗至中性 → 用索氏法除乙醚 → 除去后用5ml石油醚溶解瓶中内容物 → 然后移入刻度试管中 2）层析 在层析柱内装8cm高度中性氧化铝 → 2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠 → 以石油醚浸透 → 装皂化后的样液慢慢于柱内→ 用1～2ml石油醚洗试管 → 洗液倒入柱内，活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开，当液面降到接近硫酸钠时 → 加5ml石油醚→ 随后用5ml洗脱液逐次洗涤。 层析柱上第一个黄色层析层，一般是β-胡萝卜素，此带在12%洗脱液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黄色为止，此层可测β-胡萝卜素用，而VA一般在50%洗脱液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸约0.2ml于小试管中→加0.3ml25%三氯化锑→溶液如呈兰色→表明有VA存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。 水溶性维生素包括：维生素B1(硫胺素) 维生素B2（核黄素） 维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺） 维生素PP（烟酸） 叶酸、泛酸（维生素B3） 生物素（维生素B7） 维生素C 等， 广泛存在于动植物组织中，在食物中常以辅酶的多种形式存在，满足组织需要后，多余的量都能从机体排出。 水溶性维生素都易溶于水, 不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。 在酸性介质中很稳定，即使加热也不破坏； 但在碱性介质中不稳定，如果同时加热，更易于破坏或分解。 第三节? 水溶性维生素的测定 它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响。 维生素B2 对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C 对氧、铜离子敏感，易被氧化。 测定水溶性维生素时，一般多在酸性溶液中进行前处理。 维生素B1、B2 通常采用盐酸水解，或再经淀粉酶、木瓜蛋白酶等酶解作用，使结合态维生素游离出来，再进行提取。 维生素C 通常用：草酸、草酸-醋酸、偏磷酸-醋酸溶液直接提取。 维生素C 既具有有机酸的性质，也具有还原剂的性质。 草酸价廉，使用方便，对维生素C 有很好的稳定作用； 偏磷酸：不稳定，只能保存7~10 天，价格较贵，溶解费时，但它能沉淀蛋白质，澄清提取液，适合于蛋白质含量高的样品。 第三节? 水溶性维生素的测定 一、维生素B1的测定 VB1又叫硫胺素、抗神经炎素。 1、食品中VB1的存在形式 ⑴ 常以游离态存在； ⑵ 复合脂形式存在（磷蛋白）； ⑶ 辅羧酶形式存在。 第九章 维生素的测定 2、VB1的性质 ⑴ VB1在中性、碱性下不稳定，易分解； ⑵ VB1在酸性条件下稳定，即使加热酸性也稳定； ⑶ VB1为白色结晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。 第三节? 水溶性维生素的测定 3、VB1的测定 ----荧光法测定 ⑴ 原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中，被氧化成一种兰色荧光物质，即为硫色素，在紫外光下，硫色素发出荧光。 第三节? 水溶性维生素的测定 ⑵ 测定方法 ① 萃取 100g样品于干燥烧杯中，加入100ml0.1N H2SO4，打成匀浆，煮沸30分钟，称取一定的样品经高压锅121℃、20分钟高压酸解 ② 水解 在酸解的样品中冷却后加入含有10%糖