蓝藻ndh-blue algae ndh.docxVIP

目录摘要 IAbstract III第 1 章 循环电子传递研究现状11.1 引言：光合电子传递链 11.2 循环电子传递的发现 21.3 两条不同循环电子传递途径的鉴定 21.3.1 NDH-1 介导的循环电子传递31.3.2 PGR5 介导的循环电子传递41.4 循环电子传递的功能 51.4.1 CET 在稳态光合下提供 ATP51.4.2 CET 在光保护中的作用61.5 循环电子传递的分子组分 7NDH-CET 的分子实体——NDH-18PGR5-CET 的分子实体——PGR5/PGRL1 121.6 不同物种中 CET 的分布及重要性 131.7 展望 151.8 本研究的目的及意义 15 第 2 章 高光胁迫下 NDH-CET 活性的负调控分子机制 17 2.1 引言 172.2 实验材料与方法 192.2.1 集胞藻 6803 培养条件 192.2.2 高 NDH-CET 活性突变株的筛选 192.2.3 ndhO 基因过表达株的获得 20NDH-CET 生理活性分析 21NDH-CET 活性的生化分析 222.2.6 生物信息学分析 282.3 实验结果 292.3.1 高 NDH-CET 活性突变株的筛选及鉴定 29NdhO 抑制 NDH-CET 的活性 30NdhO 降低 NDH-1M 的稳定性 33NdhO 仅与 NdhI, NdhK 存在相互作用 34NdhO 阻碍 NdhI 与 NdhK 之间的相互作用 352.3.6 正常光转移到高光过程中 NdhO, NdhI 和 NdhK 表达变化 372.5 本章小结 37第 3 章 NDH-CET 在热胁迫下的生理功能393.1 引言 393.2 实验材料与方法 403.2.1 细胞培养 403.2.2 热胁迫条件处理 403.2.3 细胞密度及叶绿素含量测定 403.2.4 叶绿素荧光分析 403.2.5 类囊体膜粗提液的制备（见 2.2.8） 413.2.6 电泳及蛋白免疫印迹（见 2.2.9-10） 413.3 实验结果 413.3.1 NDH-CET 的缺失导致热敏感的表型 413.3.2 NDH-CET 对热胁迫的响应 423.3.3 热胁迫下 NDH-CET 的缺失主要损伤了 PSII 443.3.4 热胁迫下 NDH-CET 的缺失抑制 PSII 的修复 453.5 本章小结 47第 4 章 讨论与展望 494.1 讨论 494.1.1 蓝藻 NdhO 作为新型亚基降低 NDH-1M 稳定性 494.4.2 蓝藻 NdhO 负调控 NDH-CET 的分子机制 504.4.3 NdhO 负调控 NDH-CET 的分子机制适用于各种胁迫环境 514.4.4 NDH-CET 在热胁迫下起保护功能的作用机制 534.2 展望 54结论 55参考文献 57攻读学位期间发表的学术论文 75哈尔滨师范大学学位论文独创性声明 77致谢 79摘要NADPH 脱氢酶（NDH-1）介导的围绕光系统 I 的循环电子传递（NDH-CET） 在蓝藻循环电子途径中扮演着极其重要的角色。通常，在高光等胁迫条件下， NDH-CET 能够大大增加和产生额外 ATP，从而增强了蓝藻细胞应对胁迫环境的能 力。然而，人们至今对蓝藻细胞在胁迫条件下如何调控 NDH-CET 活性的分子调控 机制和抵御多种环境胁迫（例如高温）的实例尚了解不够。一方面，为了找到NDH-CET调控相关的蛋白，在高光条件下，对集胞藻6803 转座子插入突变体库进行筛选，获得两个高光下生长较快且NDH-CET活性增强的 突变体。经鉴定在这两个突变体中转座子插入同一个基因--ssl1690；该基因编码 NDH-1复合体NdhO亚基。以上结果暗示着在蓝藻细胞中NdhO可能抑制NDH-CET 活性。随后分别构建获得了ndhO基因的突变株ΔndhO和过表达株OX-ndhO，并分 析了两个株系中NDH-CET活性变化。结果表明ndhO基因的缺失提高了NDH-CET 的活性，相反过表达ndhO基因削弱了NDH-CET的活性，证明在蓝藻细胞中NdhO 抑制NDH-CET活性。进一步，ndhO基因的缺失或过表达并不影响Ndh亚基的表达。 然而，ndhO基因的缺失增加类囊体膜上NDH-1中复合体（NDH-1M）的积累；相 反，过表达ndhO基因降低了NDH-1M上的积累。以上结果表明NdhO通过降低 NDH-1M的稳定性，抑制NDH-CET活性。利用酵母双杂交筛选NdhO与构成NDH-1M的14个亚基之间的相互作用，结果 表明NdhO仅与NdhI和NdhK两个亚基之间存在较强的相互作用；并且NdhI与NdhK 之间也存在相互作用。而且，随着加入N