酪氨酸酶天然源抑制剂的研究报告-research report on tyrosinase inhibitors from natural sources.docxVIP

Dichlormethanel,Ethylether,ethylacetate,n-butanolandethanol(theyieldwas0.10、0.11、0.24、0.68、0.69and6.35%respectively)gradientextractiontomonitorthetyrosinaseinhibitorycomponent.Thechemicalstructurewasdeterminedbycharacteristiccolorreactionasglycosidebutnophenol.Theresultsofenzymatickineticsassaysshowedthattheinhibitoryrateofethanolcomponent(0.005g/mL)is35.1%,aftersiliconecolumnchromatographypurificationtheinhibitoryrateis54.1%attheconcentrationof0.001g/mL,andthemechanismisirreversible.Thefourpart:anti-browningeffectsagainstAgaricusbisporusjuicebytheinhibitorycomponentofthepineapplePineapplejuice,ethanolextracts,ethanolextractsH4(resultedfromcolumnchromatography)，attheconcentrationof5.00、3.55and0.39﹪inhibitingrateagainsttheagaricusbisporusjuicebrowningwere54.8、65.1and87.1﹪.TheorderwasH4﹥ethanolextracts﹥pineapplejuice.Bythiswaythemodelofscreeningantibrowningreagentswastestedtobeeffective.Thefivepart:PurificationandstructureconfirmationoffunctionalfactorH4waspurifiedbySephedexLH20,thenthepuritywastestedas99.9%byHPLC.Thetyrosinasewascompletelyinhibitedattheconcentrationof4μg/mL.Themolecularweightwasconfirmedas442byESI-MSandtheglycosidewascomposedbybifrucoseandmethoxyfuranelucidatedbyNMR.KeyWords:browningtyrosinaseinhibitorpineapple1.1前言第一章绪论褐变是果蔬及其加工产品主要的劣变形式之一。按照机制，褐变可分为非酶和酶促褐变两类，而又以后者更为常见。新鲜果蔬在采摘后，组织中仍在进行活跃的代谢活动。在正常情况下，完整的果蔬组织并不发生褐变，是因为酪氨酸酶的底物，其中主要是酚类物质存在于液泡里，在自然状态下它们与细胞质里的酪氨酸酶并无接触，但经过加工（如削皮、切片、磨浆）后，黑色素就会出现。这类变色反应非常迅速，并需要[1]和氧接触，由酶催化，称为酶促褐变。生成的黑色素会严重地影响果蔬加工产品（如鲜切、果汁、罐头等）的外观，降低消费者的可接受程度，缩短货架期。据统计，加工过程中超过50％的损失是酶促褐变引起的，催化这一反应的关键酶是酪氨酸酶，又称酚氧化酶、酚酶、单酚酶、双酚酶和多酚氧化酶，本文中统称为酪氨酸酶。随着农产品流通的全球化，鉴于酶促褐变对果蔬产品质量所引起的显著负面作用，理应得到农产品加工科技领域的足够重视。一些广受欢迎的水产品由于酶促褐变的作用，其结构中的甲壳质出现黑斑，其中严重的甚至全部变黑。由于这些产品市场经济价值很高，致使引起的损失巨大。我国每年都有大量已经运抵国外的水产品由于褐变而降价或完全失去价值[2]。面条是亚洲许多国家的主食。干面条主要有白色含盐的和黄色含碱的两类。优质产品外观应该是亮白色或亮黄色，然而由于酶促褐变的作用使得许多产品在货架期内颜色发暗，存放时间越长，颜色变化越严重。如果是湿面条，褐变会更加明显[3]。此外，酪氨酸酶在昆虫的变态发育和免疫系统中起着重要的作用[4-6]，人体的肤色也与酪氨酸酶有关[7]。由于酪氨酸酶所参与的生成黑色素的反应涉及到许多领域，如园艺、医药卫生等，其抑制剂的研究已成多个领域的热门选择课题，应用范围涉及到生物保鲜、化妆品、生物农药和医药等。近年来对酪