酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织的表达及苦参碱ag490对肝癌细胞jakstat信号转导通路的调控作用-expression of tyrosine protein kinase in hepatocellular carcinoma and regulation of matrine ag 490 on jak stat signal transduction pathway in hepatocellular carcinoma cells.docx

中文摘要方法1．收集河北医科大学第四临床医院肝胆外科2002年6月～2004年4月原发性肝癌手术切除标本30例，男2l例，女9例。年龄33～74f平均44．8±14．2)岁。另取肝硬化行肝移植手术标本10例作对照研究。2．酪氨酸蛋白激酶在组织表达检测采用免疫组化sP法，检测抗体，sP试剂盒，以及DAB显色试剂盒均购自北京中山生物试剂公司。结果1．ERK、P38、C-jun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达肝癌组ERK(0．220±0．033)、P38(O．174±0．024)、C．{un(0．183±0．064)、JAK2(0．192±0．044)、STAT3(0．197±0．078)和STAT5(0．18l±0．066)平均光密度值水平显著高于肝硬化组(O．065±0．028．0．058±0．028，O．042±0．016，O．070±O．030，O．05210．024，0．052±O．023)(PO．01)。2．ERK、P38、Cqun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中表达的相关性对原发性肝癌患者癌组织ERK、P38、C．jun、JAK2、STAT3和STAT5表达各指标间进行相关性分析，结果显示，ERK与c．iun(r=0．730，P0．01)，JAK2(FO．701，P0．01)，STAT3(F0．580，P0．01)和STAT5(r=0．371，P0．05)呈显著正相关；C．iun与ERK，JAK2(r=0．657，P0．01)和STAT3(FO．474，P0．01)呈显著正相关；JAKz与ERK，Cqun，STAT3(r=0．566，P0．叭)和STAT5(r=0．515，P0．01)呈显著正相关；STAT3与ERK，C．jun，JAK2，STAT5(F0．596，P0．01)呈显著正相关；STAT5与ERK，JAK2，STAT3呈显著正相关：P38与ERK(r=．0．404，P0．05)呈显著负相关。3．ERK、P38、C@n、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中表达与肝癌临床特征之间的关系将原发性肝癌患者根据性别、年龄、肿瘤直径、有无转移及分化程度等临床特征分组，结果显示，ERK、P38、C3un、STAT3和STAT5在肝癌组织中表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无转移及分化程度之间均无显著关系：JAK2在肝癌组织中表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无转移无显著关系，与肿瘤分化程度关联性较强(关联系数C=0．550)，在低分化癌组织中表达率显著高于高中分化癌组织。2中文摘要结论1．肝癌组织中ERK、P38、C-jun、JAK2、STAT3和STAT5的表达显著高于肝硬化组织。ERK、C-jun、JAK2、STAT3和STAT5在肝癌组织中表达呈显著正相关性，p38在同样癌组织中的表达与ERK呈负相关性。2．JAK2的过度表达与肝癌组织中细胞的分化程度有关，Ras／Raf／ERK通路和JAK—STAT通路的过度活化在肝癌发生发展过程中起重要作用，细胞信号转导系统失去正常的协调平衡可能是导致肿瘤发生的重要原因。第二部分苦参碱和氧化苦参碱对SM／dC一7721肝癌细胞株增殖及MAPK、JAK-STAT信号转导通路的影响目的：采用细胞培养方法，以不同浓度苦参碱和氧化苦参碱作用于人肝癌细胞株SMMC．7721，观察不同浓度苦参碱和氧化苦参碱对SMMC．7721细胞增殖及对信号转导通路中两个重要途径MAPK通路和JAK．STAT通路的影响，从蛋白水平和基因水平研究苦参碱和氧化苦参碱对酪氨酸蛋白激酶信号转导通路中重要蛋白激酶ERK、STAT3、STAT5在肝癌细胞表达和活化的影响。方法1．MTT法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．7721细胞株增殖影响2．RT-PCR法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．7721细胞Erk、Stat3、Stat5mRNA的影响3．Westernblotting法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．772l细胞ERK、Sn盯3、Sn盯5蛋白表达的影响结果1．苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．7721细胞株增殖影响苦参碱和氧化苦参碱能够抑制SMMC．7721细胞增殖，随药物浓度和作用时间增加细胞增殖抑制率上升，苦参碱和氧化苦参碱作用各时间组的细胞增殖抑制率与作用浓度呈显著正相关(r值O．851～O．989)；苦参碱和氧化苦参碱各浓度组不同作用时间比较细胞增殖抑制率有显著差异(PO．05或P0．01)。2．苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC．7721细胞Erk、Stat3、Star5mRNA表达的影响．不同浓度苦参碱作用于肝癌SMMC一7721细胞后，Erk(O．54±0．04，中文摘要0．39±0．05VS0．84±0．10)、Stat3(0．25±