利用人干细胞制备人鼠嵌合肝的实验分析-experimental analysis of using human stem cells to prepare human mouse chimeric liver.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日第一章绪论人鼠嵌合肝研究的目的和意义一病毒型肝炎的危害病毒性肝炎发病率高、危害性大，多少年一直困扰着人类健康。但是，因缺乏可供探索肝炎病毒感染、复制、发病机制的动物模型而阻碍了对病毒性肝炎治疗的研究与发展。人乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）引起的。HBV的感染不仅可以导致急、慢性病毒性肝炎和重型肝炎，而且还与肝硬化（livercirrhosis,LC）和肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）的发生、发展密切相关。慢性乙型肝炎患者有20%将转为LC。慢性乙型肝炎是一种世界性流行的传染病.据世界卫生组织统计，全球约有3.5亿人感染乙型肝炎病毒(HBV)。我国是HBV感染的高流行地区，根据2002年的全国HBV感染者血清流行病学调查，乙肝表面抗原（hepatitisBsurfaceantigen，HBsAg）流行率为9.09%[1]，约1.2亿人，其中慢性乙型肝炎病人约为2000-3000万，已成为重大的公共卫生问题。不幸的是，到目前为止，还没有针对HBV的特效药物。因此，我国在2005年将慢性乙型肝炎与艾滋病、结核病和血吸虫病一同被定为我国四大重点防治的传染病，对其寻找更有效的治疗途径是医学研究的重大课题[2-4]。丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)和HBV不同，目前尚无有效的丙型肝炎疫苗可利用。HCV是引起输血后肝炎的主要病原，严重威胁全球公众的健康。因此对丙型肝炎的研究也是目前肝炎防控的重点和热点。HCV的感染呈世界性分布，约1.7亿人感染HCV，感染率约为3%，每年新增病例300-400。各个国家、地区和不同人群之间存在较大差异。美国、荷兰一般人口HCV感染率为0.2%-1.8%，埃及一般人群HCV感染率可达10%-30%[5,6]。我国一般人群抗HCV阳性率为3.2%，长江以北为3.6%，长江以南为2.9%，抗HCV阳性率随年龄缓慢上升，男女间无明显差异[7]。二病毒性肝炎的动物模型研究概况病毒性肝炎具有较强的种属特异性，一般不感染培养细胞，也不感染常用的实验动物，黑猩猩是唯一敏感的实验动物，因成本价格高，较难获得，动物伦理以及种属特异等问题在一定程度上限制了对其致病机理的研究。因此，只有建立合适的动物模型，才能够探讨病毒性肝炎感染机制以及各种病毒性肝炎、HCC发病机理。在研究病毒性肝炎的过程中，人们建立了多种动物模型，为病毒性肝炎的研究提供了十分有用的工具。目前已知建立的动物模型有：黑猩猩、树鼩、土拨鼠、小绢猴、北京鸭、地松鼠、转基因小鼠及人-鼠嵌合体模型等。尽管哺乳动物肝炎病毒及其自然宿主为HBV的研究提供了较好的模型，土拨鼠、北京鸭、地松鼠等感染相应的嗜肝病毒也能产生肝炎症状，可以进行相关研究，但这些病毒与HBV毕竟不同，且不形成LC和HCC。到目前为止，除了非人灵长类的黑猩猩作为HBV动物模型外，其他动物模型均不能全面适用于乙型肝炎及丙型肝炎发生发展的各个环节，只有综合应用已有的模型，可以进行HBV、HCV感染、复制及疾病预防和治疗方面的研究。三人鼠嵌合肝的研究进展近年来将人肝细胞移植到动物体内形成“嵌合肝”，作为嗜肝病毒感染的动物模型[8]。人鼠嵌合肝动物模型的建立，解决了肝炎病毒感染种属特异性的问题，可用于HBV的研究有极其广阔的运用前景。由于嵌合于鼠肝脏中的是正常人肝细胞，能够模拟病毒感染的全过程，为研究免疫反应、发病机制、抗病毒治疗和开发强效疫苗开辟了道路。Dandri等[9]用uPA鼠(即转肝毒性基因Alb-uPA的小鼠，该基因表达可使肝细胞因功能缺陷而死亡)与Rag-2鼠构建出既有uPA基因表达又有免疫缺陷的小鼠模型，然后把正常人的肝细胞注入此鼠肝内，再给鼠接种HBV，结果发现人肝细胞可在小鼠肝内存活，并能进行多次细胞分裂，维持功能至少2个月；HBV可感染人肝