利用噬菌体展示技术淘选α‐2,6唾液酸糖模拟肽并检测其在 neuro2a细胞中的生物学活性-phage display technology was used to screen α ‐ 2,6 sialoglycan mimetic peptide and detect its biological activity in neuro 2a cells..docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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利用噬菌体展示技术淘选α‐2,6唾液酸糖模拟肽并检测其在 neuro2a细胞中的生物学活性-phage display technology was used to screen α ‐ 2,6 sialoglycan mimetic peptide and detect its biological activity in neuro 2a cells..docx

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利用噬菌体展示技术淘选α‐2,6唾液酸糖模拟肽并检测其在 neuro2a细胞中的生物学活性-phage display technology was used to screen α ‐ 2,6 sialoglycan mimetic peptide and detect its biological activity in neuro 2a cells.

III中文摘要目的: 利用噬菌体展示技术淘选 α‐2,6 单唾液酸糖的模拟多肽，并检测其合成模拟肽在鼠源神经母细胞瘤细胞系 Neuro2a 细胞中的生物学活性。方法: 噬菌体展示技术， ELISA，细胞培养，蛋白免疫印迹，免疫荧光。结果： 1、接骨木凝集素 (SNA)可特异性识别并结合 α‐2,6 单唾液酸糖 (6’‐SL)。2、在对 Neuro2a 细胞的增值性检测中，伴随模拟肽浓度的逐步增高 (0 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml, 20 μg/ml, 100 μg/ml)，其作用表现为先促进后抑制，类似 “抛物线 ”性关系，差异有统计学意义 (P0.05)；而随机肽组作用无明显差异。 3、在对 Neuro2a 细胞的形态学检测中，模拟肽与 6’‐SL 具有类似的生物学活性，表现为可使胞体圆润，细胞突起生长较短；随机肽组与空白对照组则表现为胞体多样不规则，细胞突起生长较长；模拟肽组与溶剂对照组比较有统计学差异 (P0.05)。4、在蛋白质免疫印迹检测中，模拟肽与 6’‐SL 在低浓度剂量时 (5 μg/ml)，均可降低细胞凋亡相关蛋白 Caspase3 的表达，且与对照组比较时具有统计学意义 (P0.05); 但在高浓度剂量组 (20 μg/ml)时对细胞凋亡信号的表达无差异。 5、在免疫荧光染色时， Ki67 信号在 6’‐SL 与模拟肽组中多数细胞的胞核中表达，有助于细胞增殖；神经胶质细胞标志物 GFAP 信号又在其胞质中强度增加，说明此两者具有诱导 Neuros2a 细胞向神经胶质细胞方向分化的趋势。结论： 1、噬菌体展示技术在淘选糖模拟肽的应用上是一种强大生物学研究工具。 2、根据 Bio‐SNA与 6’‐SL之间具有识别、亲和特异性，本课题使用以 SNA为包被底物通过噬菌体展示技术所淘选的 6’‐SL模拟十二肽的方法步骤简便可行，技术难度要求较易，资源成本消耗较低廉，经济效价比较高。 3、本实验的功能性研究表明，唾液酸糖模拟肽与唾液酸、唾液酸糖（ 6’‐SL）具有部分相似作用，包括在鼠源性神经母细胞瘤系 Neuro2a细胞的体外实验中抑制神经细胞突起的生长，经给予刺激后可在胞膜上可有神经元标志物 NeuN及神经胶质性标志物 GFAP的表达。 4、初步认为，此模拟肽对 6’‐SL的生物学功能具有模拟类似性。 5、该十二肽序列以及合成的模拟肽在对于神经系统脱髓鞘疾病，脑细胞的缺血性疾病等相关的基础研究和临床应用具有一定的应用价值。关键词：噬菌体展示； α‐2,6 唾液酸糖；模拟肽； Neuro2a 细胞 ABSTRACTObjective: Screening of α‐2,6‐sialyllactose Mimetic Peptide Via Phage Display and Analysis of Its Bioactivity on Neuro2a Cells.Methods:Phage Display,ELISA,Cell Culture, Western blot,Immunofluorescence Staining,Neurite outgrowth MearsurementResults:SambucusNigraAgglutinin(SNA)possessesspecificaffinityforα‐2,6‐sialyllactose (6’‐SL).In proliferation test, both the mimetic peptide and 6’‐SL showed promotion at a low dose (5 μg/ml), while inhibitation effects were observed at a high dose (100 μg/ml), demonstrating a parabola like tendency, and showing significant difference when compared with the vehicle control (P0.05).In morphological test and neurite outgrowth assay, cells treated with both the mimetic peptide and 6’‐SL showed a round shape with shorter projections, while in the vehicle control and scrambled peptide groups cells showed no