课题结题总结报告-中国作物种质资源信息网.DOC

国家重点基础研究发展规划 课题结题总结报告 课题编号：G1998010203 课题名称：大豆核心种质构建 起止年月：1998年10月-2003年10月 负 责 人：邱丽娟 联系地址：北京中关村南大街12号 电话传真：010 010依托单位：中国农业科学院作物品种资源研究所 承担单位：中国农业科学院作物品种资源研究所 吉林省农业科学院大豆研究所 2003 年 10 月 8日 一、计划任务完成情况AFLP分子标记技术，对我国不同纬度野生大豆和栽培大豆进行了多样性分析，发现野生大豆的多样性较栽培大豆更为丰富；根据AFLP结果，将野生大豆和栽培大豆划分为2个完全独立的类群。值得注意的是，不仅不同纬度的相同份数野生大豆和栽培大豆之间存在明显差异（赵洪锟等，2001），利用SSR标记分析也发现野生大豆和栽培大豆差异明显，且这种差异与所分析的野生大豆和栽培大豆份数无关（许占友等，1999）。这为野生大豆和栽培大豆作为两个物种的分类地位提供了分子生物学依据。 2．栽培大豆的总体分析 在国家种质库中保存的栽培大豆中，有很多同名的品种，这些品种的表型差异很小。为了确定栽培大豆的取样总体，对品种数目较多的同名品种进行了分析。其中，对来源于东北三省的“满仓金”进行SSR标记和农艺性状分析，发现相同来源或者是不同来源的同名材料之间差异较大，因此都具有保存价值。此外，对贵州的“细黄豆”、黄淮地区的“天鹅蛋”、河南的“小籽黄”和“牛毛黄”进行SSR分析，也证明其遗传多样性并具有保存价值（严哲等，2003）。这表明国家作物种质资源库保存的大豆品种资源具有很低的重复性，都可用于构建大豆核心种质。 3．确定了大豆遗传多样性分析和核心种质鉴定所需的SSR适宜位点数 用南方秋大豆为材料，对200个SSR位点在琼脂糖胶上初筛，从中选出96个SSR位点在变性聚丙烯酰胺胶上复鉴，发现位点数在56.8－68.2及等位变异数在500－600个时，与96个位点及845个等位变异所揭示种质间遗传差异大小接近或达到极显著相关。因此，确定了60个SSR核心位点，具有以下特点：分布在大豆20个整合遗传连锁群，相邻位点间平均遗传距离在50cM左右；在80份秋大豆初选核心种质中表现出较高多态性，平均每个位点等位变异数为9.3，多态性信息含量（PIC）值为0.773；在检测的秋大豆绝大多数种质基因组中，均为单一拷贝的位点，具有较高特异性；（5）在相同的PCR扩增条件下，同一位点不同等位变异间易于识别且扩增强度较为一致。 图1. 不同SSR位点分析大豆种质的标准误 从大豆初选核心种质中随机选择190份作为无偏样本，用60对SSR引物扩增，获得606个等位变异，平均每个位点有10个等位变异，位点多态信息量范围从0.55到0.99，平均为0.83。对190份大豆相似系数矩阵的标准误分析表明，等位变异数在470～490之间（位点为47～49），矩阵之间的相关系数就超过显著相关。随着引物数的增加（引物按PIC信息量由高到低排序），相似系数矩阵的标准误逐渐降低，开始下降较快，如在引物数为5时，标准误为0.14，当引物增加到20时，标准误是0.07，下降了50%，当引物数增加到40时，标准误为0.06，与引物数为20时标准误相比，仅下降了14%。当引物数增加到50以上，标准误趋于一个恒定的值。当等位变异数达到570以上（位点数约为57个），相互之间相关性达极显著，标准误在0.05，可客观地反映出中国栽培大豆遗传变异关系（图1）。通过不同分析表明，从这套SSR核心位点中选择至少37个位点才能进行种质遗传多样性分析。 （二）建立了核心种质的取样策略 1．野生大豆核心种质构建 1.1 取样策略筛选 采用Brown提出的10%的取样比例，比较国际上通常采用的5种取样策略，以遗传多样性取样策略的符合度明显高于其他四种取样策略，性状符合度可达到97.2%，而其他4种取样策略即随机取样、恒量取样、比例取样及对数取样的符合度分别为85.6%、84.7%、82.9%及88%。因此，遗传多样性取样策略是构建野生大豆资源核心群体的最佳取样策略。利用最佳取样策略，计算不同取样比例所获群体对基础群体符合度。在10%以下时随取样比例增加，其符合度迅速增加。高于10%，随取样比例增加符合度增加缓慢。因而确定10%左右是构建野生大豆核心资源的适宜取样量。 1.2 核心种质的筛选 根据野生大豆来源及生态区，可将野生大豆分为8组。前7组来自7个自然生态区（徐豹，1989），后1组为人工杂交创新资源。在野外收集的7个组中，早熟类型区（第2组）和中熟类型区（第4组）收集材料最多，分别为2410份和1628份。晚熟类型区