试验特殊显微镜的使用Ⅰ.DOC

细胞生物学实验指导 唐山师范学院生命科学系 生物技术教研室 2007年2月 前 言 细胞生物学是生物系各专业学生必修的一门基础课，是一门实验性较强的学科。通过这门实验课，希望能够帮助大家加深理解和巩固课堂讲授的某些细胞生物学内容，掌握一些基本的操作技能，提高分析问题和解决问题的能力，养成实事求是、严格、严密的科学作风。 本《细胞生物学实验学指导》目 录 实验一 特殊显微镜的使用（Ⅰ）……………………………………….. 3 实验二 特殊显微镜的使用（Ⅱ）……………………………………….. 8 实验三 细胞大小和形态的观测 ………………………………………... 22 实验四 细胞的凝集反应 …………………………….…….………...…... 25 实验五 细胞的渗透性 …………………………………………...………. 28 实验六 巨噬细胞吞噬现象的观察 ……………………………...………. 34 实验七 死活细胞的鉴定 ………………………………...………………. 39 实验八 液泡系的超活染色与观察 ……………………...………………. 43 实验九 叶绿体的分离与荧光观察 ……………………...………………. 45 实验十 线粒体的分离提取与超活染色观察 ……………...……………. 52 实验十一 植物细胞骨架的光学显微镜观察 …………………...………... 59 实验十二 过氧化物酶的显示方法 …………………………...……….….. 62 实验十三 酸性磷酸酶的显示方法 ……………………………...………… 68 实验十四 动物染色体标本的制备与观察 ……………………...………… 72 实验十五 细胞融合实验 ……………………………………....…….…….. 75 附录Ⅰ 细胞生物学实验须知 ……….…….……………...…………….. 80 附录Ⅱ 细胞生物学实验绘图方法与要求 ………………...…………… 81 附录Ⅲ 实验设计的原则 ……………………………………...…………… 82 附录Ⅳ 细胞生物学实验图片 ………………………………...……………84 实验一、特殊显微镜的使用（Ⅰ） 暗视场显微镜的使用 一、 实验目的： 掌握暗视场显微镜的原理、构造和使用方法。 二、 实验原理： 暗视场显微镜在构造上应用丁达尔现象（Tyndall phenomenon:当聚光光束射入溶胶时，从光束的侧面可以看到一条发亮的光柱，在光的传播过程中，光线照射到粒子时，如粒子直径略小于入射光波长，则发生光的散射，每个微粒就成为一个发光点，从侧面可以看到一条光柱。），装配了一类特殊聚光器——暗视场聚光器，使入射光束，从聚光器斜向照明被检样品。由于照明光线与显微镜光轴形成较大的角度通过物场，或因聚光器的特殊构造，照明光线在聚光器顶透镜或盖片的上表面发生全反射，致使照明光线不能入射物镜之内。但是，样品被照明并发出反射光。镜检时，因不能直接观察到照明光线，与光轴垂直的平面视场暗黑，在深暗的背景上能清晰地看到由散射光和反射光形成的明亮的物体影像，物像与背景造成极大的反差。视场内的样品，被斜射光线照明，可从样品各种结构表面散射和反射光线，看到许多细胞器的明亮轮廓，诸如细胞核、线粒体、液泡以及某些内含物等。如果是正在分裂的细胞，其各类纺锤丝和染色体亦可窥见。 暗视场显微镜是利用样品的散射光和反射光进行观察，所以只能看到物体的存在与运动而不能辨清其微细结构。暗视场显微镜的检测能力，取决于入射光的强度和视场的反差，后者又随微粒及其背景的折射率差别的加大而增加。 暗视场显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视场显微镜为暗视场照明更为贴切。暗视场照明是斜向照明的一种，这种照明法能提高对微小物体的分辨能力，对大小在0.004μｍ以上的微小粒子，尽管看不清楚其结构，亦可清晰地分辨其存在和运动。 暗视野照明法通用的有两种方式：中心遮光法和暗视野聚光器法。 2.1.中心遮光法 用中央纸板（暗视场光挡）遮去中央 光束，然后将这样的纸板放在聚光器下面 的滤光片支架上，修整遮光面积和纸板大 小，使聚集在聚光器焦点的直接照明光线 的中央光束遮掉，视野基本黑暗，而保证 侧面斜射过来的光照亮被检物。原理见 图1-1： 暗视场光挡（dark field stop）是用黑 纸、厚卡纸或金属片制成，光挡遮住照明 光束中央部分的光线，使之不能进入物镜， 而取得暗视场照明的效果。照明光线从光 挡周缘呈环形光束通过聚光镜斜向照明被 检样品