第四章第二节a-淀粉酶地固体发酵技术.pptVIP

第一节 а- 淀粉酶固体发酵 生产技术 霉菌а- 淀粉酶大多采用固体曲法生产；细菌а- 淀粉酶则以液体深层发酵为主。 固体培养法以麸皮为主要原料，酌量添加米糠或豆饼的碱水浸提液，以补充氮源。在相对湿度90%以上，曲霉用32-35℃培养36-48h，立刻在40℃下烘干或风干，即成工业生产用粗酶。 米曲霉固体培养法生产а- 淀粉酶工艺流程： 润水 粉碎 熟料 厚层通风制曲 烘干 粗酶制剂 抽提 蒸煮 过滤 烘干 压滤 沉淀 原料 成品 种曲 原菌 斜面试管培养 纯种三角瓶培养 种曲培养 粉碎 包括内容： 原料的粉碎、润水及蒸煮三方面的内容 目的：使蛋白质达到适度变性，淀粉充分糊化，以利于微生物的生长繁殖和代谢。 处理方法： 粉碎机粉碎或过筛，要求粒度为2-3mm为宜，大小均匀。 一、原料的处理 原料的选择： 麸皮40-50% （提供微生物生长繁殖需要） 稻壳 20-30%（改善工业培养的通风性、补充营养源） CaCO3 1% （用于调节pH值,酶激活剂） 水 30-40% 蒸煮的目的 使蛋白质适度变性形成变性蛋白和少量氨基易被微生物分解； 促进淀粉糊化成糊精和寡聚糖。 杀菌功能，利于菌体生长。 高压旋转蒸煮锅（有假底式） 高压旋转蒸煮锅（有假底式） 高压旋转蒸煮锅（无假底式） 蒸煮技术要求： ①普通法：0.12Mpa ，15-30min ②高短法：0.18-0.2Mpa，3-5min。 ③淀粉充分糊化，蛋白消化率78%以上。 熟料的要求： 呈浅淡的黄褐色，有香味及弹性，无浮水，无硬心，不粘，无其他不良气味，水分含量为46% -50%（因季节而异），消化率在78%以上。 （一）菌种的选择 由于不断的选育改良，现在工业生产上用的菌种产生а- 淀粉酶的能力已经是原有野生菌种的数倍或数十倍。 目前，我国常采用的霉菌为 米曲霉612或2120。它具有遗传性能稳定，不产生有毒代谢产物，生产周期短，酶活性高等特点。 二、种曲的制备 （二）、菌种扩大培养 1、斜面试管培养 将原菌种接入米曲汁或麦芽汁琼脂斜面培养基，经过32-34℃，70-72h试管培养，待菌丝布满斜面，并着生黄绿色的孢子即已成熟，可作为下一步培养的种菌或在低温下（0-4℃）储藏备用，每3个月转接一次。 2.纯种三角瓶种子培养 （1）培养基：25g麦麸，5g玉米粉及30mL水，加HCl三滴，搅拌后装入500ml三角瓶中，包扎后120℃灭菌30min，冷却，备用。 （2）接种量：每支斜面试管菌种接种三角瓶培养基5-6支。 （3）培养：接种后将三角瓶置于32-34℃下培养，约18h后，菌丝体发白结饼，此时应摇瓶，打碎结饼。再过4h，菌丝体再次发白结饼，再次摇瓶。培养18h后，应将其倾斜放置，并注意摇瓶，直至长满均匀一致的黄绿色孢子，即可作为三角瓶种子，冷藏备用。 3、种曲培养： （1）、设备：种曲室，曲盘、草帘、纱布等 （2）、灭菌 常用灭菌剂 方法一： KMnO4：甲醛 = 1：2熏蒸 （注意用氨水收） 方法二：硫磺：甲醛 = 2.5：1加热熏蒸 （注意控制，防止着火）。 用量以甲醛10g/m3空气量进行计算。 （3）、培养方法：（3天曲法） 接入量为0.5-1.0%，料层厚1cm左右为宜 直立式堆叠 曲房保温28-30℃培养， 干湿相差1°16h培养 当品温达到34℃左右时，曲料面层稍有发白及结快时，进行第一次翻曲。 十字堆叠 室温继续保持在28-30℃，翻曲后4-6h，品温可达到36℃左右，在进行第二次翻曲，注意保持水分 3天后，种曲成熟，麦麸上布满黄绿色孢子。既为种曲。 （4）、种曲质量检验 A镜检孢子数法：显微镜直接观察种曲稀释液中的孢子数。 要求≥25-30亿个/g种曲（湿基计） B摇落孢子数法：称取10g种曲，烘干后摇落其孢子（用75目筛 D=0.2mm），求干孢子与干物质的百分数，一般 要求在18%左右。 C 发芽率测定法：利用悬滴培养法。要求发芽率≥90%。 1、外观检验 孢子旺盛，呈新鲜的黄绿色，具有种曲特有的曲香，无夹心，无根霉、青霉等其他杂色。 2、孢子数测定 菌悬液 无菌水溶液 培养基 三、厚层通风制曲 厚层通风制曲：就是将曲料置于曲池内，其厚度为25-30cm，利用通风机供给空气及调节温度，从而促进米曲霉迅速生长繁殖。 1、制曲设备 大