03-dna复制、修复与重组幻灯片.pptVIP

DNA的生物学功能 储存遗传信息 复制遗传信息 表达遗传信息 产生可遗传的变异 DNA复制的酶学 DNA复制是一个非常复杂的酶学过程，它需要30种以上的酶和蛋白质，人们常把这些酶和蛋白质称为复制体系，其中一部分酶和蛋白质结合在一起，协同动作，构成所谓复制体（replisome）。 DNA聚合反应与聚合酶 参与DNA聚合反应的有三种酶：Pol I，Pol II和Pol III， 以四种核苷5’-三磷酸，即dATP、dGTP、dTTP和dCTP为前体合成聚核苷酸。Pol II的具体作用还不清楚，根据实验室工作，它在复制过程中似乎没有什么作用，Pol III极其复杂，是大肠杆菌中是主要的聚合酶。 DNA聚合酶活性： 在有引物和模板的情况下，Pol I和Pol III都具有DNA聚合酶活性，但Pol I的聚合酶活性主要用于DNA的修复和RNA引物的替换，而Pol III才是使DNA链延长的主要聚合酶。 外切核酸酶活性： 3’?5’ ：校对、保真 5’?3’ ： Pol III只作用于单链 缺口填充能力 Pol III只能填充几个碱基的小缺口 Pol I可以填充很大的缺口 其他酶类 DNA连接酶 螺旋酶 DNA旋转酶 ……… DNA复制的基本过程 起始 链延伸 复制终止 真正的酶促机理和新DNA分子合成的步骤是十分复杂的，需要多种特异性酶和蛋白因子的参与，涉及蛋白质、DNA和RNA等生物大分子之间的相互作用。 1. DNA复制的起始 DNA复制起始部位的序列特征 DNA复制都是在特定起始部位(Ori)开始。 大多数原核生物基因组和细菌质粒只有一个Ori位点，真核生物染色体中有多个Ori。 由一个复制起始点构成的DNA复制单位称为复制子。 原核生物染色体和质粒都是独立的复制子，真核细胞染色体中会有许多复制子。每个复制子在一个细胞周期中都必须起动而且只能起动一次。 复制起点（origin） 一般指的是DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。噬菌体、细菌染色体、质粒和一些动物病毒的DNA通常具有明显的复制起点。酵母也有特异的复制起点，在细胞周期S期染色体复制时起重要的作用。在真核生物中，复制起点很复杂，迄今仍难于在分子水平上阐明其特征。 E.coli、酵母和SV40的复制起始位点的一些共同特征 复制起始位点中有多个独特的短重复序列。 这些短重复序列被多亚基的复制起始位点结合蛋白识别，这些蛋白对于复制酶在复制起始位点的组装起关键作用。 复制起始位点附近一般都有富含AT的序列，以利于DNA双链的解旋，产生DNA复制模板。 复制起始位点共同的作用 结合多种蛋白，并有助于它们之间的相互作用，从而有效地起始DNA的复制。 复制起始位点可以决定基因组在S期复制的时间顺序。 复制起始位点可以防止DNA复制干扰基因在S期的转录。 参与复制起始的蛋白质 SSB T抗原 ORC、MCMp、Cdc45 前导链的引发过程比较简单，只要有一段RNA引物，DNA聚合酶就能以此为起点一直合成下去。 对于滞后链来说，引发过程就十分复杂，需要多种蛋白质和酶的协同作用，还牵涉到冈崎片段的形成和连接。 2. DNA链的延伸 引发一旦完成，DNA聚合酶就在RNA引物的3’-OH端按照模板链的碱基顺序，以碱基互补的规则延伸DNA链。无论原核还是真核生物，前导链是按5’?3’方向连续合成，后随链的延伸也是按5’?3’，但不是连续合成，而是先合成多个RNA引物，再延伸为多个冈崎片段，最后连接起来。 原核/真核生物DNA链延伸的不同 主要是催化的酶不同 E.coli前导链和后随链的合成都是由DNApol III催化。 SV40前导链和后随链的合成是由二个不同的DNA聚合酶催化完成的(DNApol?向DNApol?) 3. DNA复制的终止 一般说来，链的终止不需要特定的信号，也不需要特殊的蛋白质参与。但是，环状或线性DNA复制终止的机制却有所不同。 环状DNA复制终止 环状DNA复制时，可在离起始点180。相遇，即两个复制叉同时到达一个部位。有些环状DNA分子内含有终止位点，一个复制叉先到达该处停下来，然后另一个复制叉也到达该部位。如在正常情况下，λDNA复制时终止点与起始点相差180。。如果删去一些非必需区域，或者插入一些无关的片段从而改变了复制起始点和终止点的相对距离，经改造后的DNA复制终止点仍保持与起始点相差180。。表明λDNA分子没有特定的终止点。 λ噬菌体DNA的复制调控 噬菌体和原噬菌体 原噬菌体基因组整合在宿主染色体中，不能自主复制，依赖于宿主染色体进行复制，而且噬菌体基因表达被阻遏。 几个概念 λ噬菌体感染大肠杆菌以后。可将其基因组整合到细菌染色体上，并成为细菌基因组的—部分，随着染色体DN