khat诱导人肝癌细胞凋亡及其机制分析-khat induces apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells and its mechanism analysis.docxVIP

主要英文缩略语索引（Abbreviation）英文缩写英文全称中文名称FCMFlow Cytometry流式细胞术WBWestern blot蛋白质免疫印迹HCCHepatocellular carcinoma肝细胞性肝癌FBSFetal bovine serum胎牛血清PBSPhosphate-buffered salines磷酸盐缓冲液 EDTAEthylenediaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸 PMSFphenylmethylsulfonyl fluoride苯甲酸磺酰氟化物 APAmmonium persulfate过硫酸铵SDSSodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠DTTDithiothreitol二硫苏糖醇RTRoom Temperature室温DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜PIpropidine iodide碘化丙啶ECLenhanced chemiluminescence增强化学发光TdTTerminal deoxynucleotidyl transferase末端脱氧核苷酸转移酶HRPHorseradish peroxidase辣根过氧化物酶DABDiaminobenzidine二氨基联苯胺PSPhosphatidylserine磷脂酰丝氨酸中文摘要目的Khat 是一种从阿拉伯茶树中提取出的有机物，可诱导细胞发生凋亡， 本研究在细胞和动物水平初步探讨 Khat 诱导肝癌细胞凋亡的作用及其分子机 制。方法 体外试验，不同浓度 Khat 在不同时间点处理 HepG2 细胞株，采用细 胞生长抑制试验、流式细胞术(Flow Cytometry ，FC )和 Hoechst 33258 染色等检 测 Khat 诱导的 HepG2 细胞凋亡，采用 Westren blot 法检测活性 caspaes-3 和 caspase-9 的蛋白表达水平。体内试验，制备裸鼠皮下人肝癌（HepG2 细胞）种 植瘤模型，采用两种浓度 Khat 进行干预，观察 Khat 对裸鼠成瘤和裸鼠生存率的 影响，并采用 TUNEL 染色检测瘤细胞凋亡情况。结果Khat 在浓度为 100~400ug/ml 系列范围内，在不同时间点 4h、8h、16h 及 24h 处理 HepG2 细胞，细胞增殖抑制率曲线随 Khat 作用时间延长而相应升高。 流式细胞仪分析结果显示：200 μg/ml Khat 作用 HepG2 细胞 4h、8h 和 24h，凋 亡率分别为 6.2±1.5%、 15.5±2.1%、 33.5±4.1%。Khat 作用于 HepG2 细胞 24h 后诱导细胞发生明显的凋亡形态学变化。Khat 处理组活性 caspase-3 和 caspase-9 蛋白表达均明显升高, caspase-9 抑制剂 Z-LEHD-FMK 在 20μM 终浓度可完全阻 遏 Khat 诱导的 caspase-9 的活性改变，同时部分阻遏 caspase-3 的活性，与对照 组相比，差异有显著统计学意义（P ＜0.01)。分别采用高、低浓度 Khat 干预裸 鼠皮下肝癌种植瘤，肿瘤生长受到显著抑制，与对照组相比，差异具有统计学意 义（P ＜0.01)。TUNEL 染色结果亦显示 Khat 可诱导裸鼠皮下肝癌种植瘤细胞 发生凋亡。结论Khat 可通过激活 caspase-9 和 caspase-3 而诱导 HepG2 细胞凋亡，抑 制细胞增殖，从而有效抑制裸鼠皮下人肝癌种植瘤的生长。关键词KhatHepG2 细胞肝癌种植瘤细胞凋亡ABSTRACTObjective：To investigate the apoptosis effect of Khat on transplantation tumor from hepatic carcinoma HepG2 cells in node mice and its molecular mechanism. Methods：In vitro test method, HepG2 cells were deal with by different Khat concentrations at different points. Then cell apoptosis that is induced by Khat wasassayed by flow cytometry assay, Hoechst 33258 staining method and electron microscopy method. Cell viability was assayed by cell growth inhibition assay. In