dna修复相关基因在镉亚慢性暴露大鼠中的表达改变-expression changes of dna repair related genes in cadmium subchronic exposed rats.docxVIP

英文缩略词汇表（续）缩写语英文名称中文名称SSBSing1e-strand DNA binging protein单链 DNA 结合蛋白ssDNASing1e-strand DNA单链 DNASSBRSing1e strand break repair单链断裂修补dsDNADoub1e-strand DNA双链 DNADSBRDoub1e strand break repair双链断裂修补WBWestren-b1ot蛋白质印迹SDSPo1yacry1amide ge1 e1ectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳hOGG1human 8-hydroxyguanine g1ycosy1ase人 8-羟基脱氧鸟嘌呤糖苷酶NERNuc1eotide excision reaction核苷酸切除修补XRCCX-ray repair cross comp1ementingX 线修复交叉互补DNA 修复相关基因在镉亚慢性暴露大鼠中的表达改变硕士研究生: 邵超指 导 教 师 : 雷毅雄 教授中文摘要背景镉(Cadmium，Cd)是一种广泛存在于环境中的重金属污染物和致癌物。由于 其在体内能长期蓄积，不易排除，故易对机体产生慢性及远期毒效应，甚至导致 人类与哺乳动物多种肿瘤如肺癌、肾癌、前列腺癌和胰腺癌等。1993 年国际癌 症研究组织已将镉列为第一类致癌物，但其分子毒作用机制仍不清楚。近年来， 来自不同研究领域分别试图从整体、器官、细胞和分子水平等方面来阐明镉对机 体的毒作用及其机制，特别是镉低水平长期毒作用已经成为毒理学研究的热点。 有研究认为，DNA 修复功能被抑制可能是金属毒作用的重要机制之一，但关于 DNA 修复基因在亚慢性镉暴露动物体内的表达变化却鲜见报道。因此本研究利用课题 组前期已成功建立的大鼠亚慢性镉暴露模型，对大鼠靶器官 DNA 修复基因 XRCC1 和 hOGG1 表达变化进行研究，为镉化物低水平长期致机体害的分子毒作用机制提 供新的实验数据。方法2.1 根据 XRCC1 和 hOGG1 基因的 mRNA 序列，用 Primer Express 5.0 软件分 别设计 XRCC1 和 hOGG1 基因的上下游引物。应用 Trizol 试剂盒提取大鼠肝、肾、 心与肺脏器中总 RNA，经逆转录后用实时荧光定量 PCR(Taqman 和 SYBR Green) 方法检测 XRCC1 和 hOGG1 基因的表达情况。2.2 用总蛋白提取液并按照其说明提取大鼠肝、肾、心与肺等靶器官中总蛋白，经蛋白定量后采用 Western blot 检测方法分析 XRCC1 和 hOGG1 蛋白的表达改变。同时，分析大鼠肝、肾、心和肺脏器的 XRCC1 和 hOGG1 表达水平与相应各 脏器镉蓄积量及其病理损害的关系。2.3 所有实验均重复三次，实验数据以 x ±s 表示，如果原始资料为偏态分 布则用对数(log)进行转换以达到正态化，运用 t 检验、单因素方差分析、 Games-Howe11 检验和相关分析等对数据进行处理，P0.05 有统计学意义。结果3.1 通过 Taqman 实时荧光定量 PCR 分析，在镉高、中、低剂量染毒大鼠中， 各种镉靶器官的 XRCC1 基因表达量以 TBP 为内参照进行标化计算，发现 XRCC1 mRNA 表达水平在肝脏分别是相应对照组的 44%，31%和 13%，在肾脏分别是相应 对照组的 62%，29%和 15%，在心脏分别是相应对照组的 42%，30%和 15%；在肺脏 的分别是相应对照组的 47%，28%和 19%，提示随着大鼠 CdC12 暴露水平的升高而 其肝、肾、心与肺等靶器官的 XRCC1 基因表达水平明显下调，存在良好的剂量- 反应关系(P0.01)。3.2 经过 SYBR Green 实时荧光定量 PCR 检测，在镉高、中、低剂量染毒大 鼠中，各种镉靶器官的 hOGG1 基因表达量以 β-actin 为内参照进行标化计算，观 察到 hOGG1 mRNA 表达水平在肝脏分别是相应对照组的 67%，50%和 16%；在肾脏 分别是相应对照组的 40%，21%和 12%，在心脏分别是相应对照组的 72%，59%和 27%；在肺脏的分别是相应对照组的 75%，52%和 29%，显示随着大鼠 CdC12 暴露 水平的升高而其肝、肾、心与肺脏器的 hOGG1 基因表达水平显著下调，有明显的 剂量-反应关系(P0.01)。3.3 运用 Western b1ot 检测与分析，可见大鼠肝、肾脏器的 XRCC1 和 hOGG1 蛋白质在各染镉大鼠组中均出现不同程度的表达下调，与相应对照组相比有下降 趋势，此现象在肝组织中最为明显，进一步确证了 XRCC1 和 hOGG1 基因在镉暴霸 大鼠靶器官中的下调表达。