klebsiella sp.产絮凝剂的制备及絮凝剂结构与特性研究-klebsiella sp. preparation of flocculant and study on its structure and characteristics.docxVIP

摘要微生物絮凝剂因其高效的絮凝活性，无毒、无二次污染等优点而成为水处理方向的研究热点。本论文从剩余污泥、河道底泥、泥土中筛选出10株所产絮凝剂絮凝活性高的菌种，通过综合考虑各自的絮凝活性大小和发酵时间长短，选择菌种S3作为后续研究菌种。并对其进行鉴定和发酵培养条件优化，分析所产微生物絮凝剂的化学组分，进一步研究了该絮凝剂的结构和特性，得到以下主要结论：（1）通过对S3形态特征和理化特征分析，表明S3无鞭毛和芽孢，有荚膜，为革兰氏阴性菌。经DNA同源相似性比对，鉴定S3为克雷伯氏杆菌属（Klebsiellasp.）。Klebsiellasp.的最佳发酵培养条件为：葡萄糖20g，(NH4)2SO41.88g，KH2PO42g，K2HPO45g，MgSO4·7H2O0.2g，FeSO4·7H2O0.01g，NaCl0.5g，H2O1L，pH值为7~7.2，搅拌速率120r/min，接种量1%（v/v），发酵培养时间24h。在最佳条件下，可以提高Klebsiellasp.产微生物絮凝剂效率，及保持菌种性状的稳定性。（2）通过离心分离Klebsiellasp.代谢产生的胞外分泌物，再经过乙醇提取，透析和凝胶过滤层析纯化，获得微生物絮凝剂MBFX7，其产量为2.45g/L。MBFX7的糖呈色反应和蛋白质呈色反应表明，其主要由糖类构成，并测定其相对分子量为2.25×105。红外光谱分析表明，MBFX7具有羟基、羧基、羰基和磷酸基团，但活性基团的数量会随着发酵时间的延长而减少；用MBFX7絮凝废水中的Cd2+以后，其原有的活性基团消失或被取代，表明活性基团对MBFX7的絮凝活性有较大贡献。（3）MBFX7的稳定性研究表明：当环境温度低于80℃时，MBFX7的絮凝率均达90%以上；当环境pH值为7~12时，MBFX7的絮凝率能保持在82%以上；MBFX7具有较好的遗传稳定性。（4）MBFX7的最佳絮凝条件为：在96mL浓度为1g/L的高岭土浑浊液中，加入10g/L的CaCl2溶液1.5mL，调节pH值至7~8，MBFX7的最佳投加量为2mg/L，快速搅拌1min，慢速搅拌4min，静置5min。用MBFX7絮凝处理实际工业废水，其对Mn、Fe、Zn、Cd、COD的去除率分别为98.29%、98.99%、99.27%、96.57%、79.92%。关键词:微生物絮凝剂;絮凝剂结构;絮凝剂特性;重金属废水;克雷伯氏杆菌属AbstractMicrobialflocculantswhichhadefficientflocculatingactivitieswithouttoxicandsecondarypollutionhavebecomearesearchhotspotinthestudyofthewatertreatment.Inthisstudy,therearetenstrainsofmicroorganismthatcanproducethehighflocculatingrateofthemicrobialflocculantsareselectedfromactivatedsludge,substratesludge,andsoil.Throughcomparingtheirflocculatingactivitiesandfermenttime,wechoosetheS3tobethestrainforthesubsequentstudy.Andthecharacterofthestrainisstudied,andtheculturalconditionoptimizationofthestrainisdone.Afterthat,themicrobialflocculantsareextracted,andtheirstructureandfeaturesarediscussed.Theconclusionsofthisstudyarethefollowings:Inthestudyofthemorphologicalcharacteristicsandthephysicochemicalcharacteristics,thestrainisGramnegativebacteria.Ithasnoflagellumandspore,buthascapsule.ThestrainbelongstogenusKlebsiellasp.whichistestifiedbycomparingtheDNAsimilarity.TheresultoftheculturalconditionoptimizationofKlebsiellasp.isthattheglucoseis20g,(NH4)2SO4is1.88g,KH2PO4is2g,K2H