【医学课件】免疫学检测原理及临床应用.pptVIP

免疫学检测原理及临床应用 甘瑞静 免疫学教研室 内容提要： 概念 基于抗原-抗体反应的检测方法 免疫细胞检测 免疫分子检测 免疫学诊断与检测 概念： 免疫学 细胞生物学 分子生物学 应用：免疫相关疾病的诊断、病情检测和疗效评价等。 （一）抗原-抗体结合反应的特点 特异性 带现象与可见性 可逆性 抗原抗体结合的带现象与可见性 可逆性： （二）抗原抗体反应的影响因素 电解质 酸碱度 温度 抗原抗体的性质 （二）抗原抗体反应的影响因素 1.电解质： 亲水性---------疏水性 失去电荷------发生凝集 （二）抗原抗体反应的影响因素 2、酸碱度： 最适pH值：6—8 假阳性 假阴性 （二）抗原抗体反应的影响因素 3.温度： 适当温度------增加碰撞机会 加快结合速度 37℃ （二）抗原抗体反应的影响因素 4、抗原和抗体的性质 关键因素---特异性和亲和力 决定因素---二者的比例 （一）凝集反应（agglutination） 颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。 （一）凝集反应（agglutination） 1、直接凝集(direct agglutination) 2、间接凝集 （indirect agglutination） 3、间接凝集抑制试验 （in direct agglutination inhibition test） 4、协同凝集试验 （co-agglutination test） （二）沉淀反应（precipitation） 1、单向免疫扩散（single immunodiffusion） 常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。 （三）补体参与的抗原抗体反应 1、50 %补体溶血试验（CH50测定） ——血清总补体量测定 酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶 1、免疫荧光法（immunofluorescence,IF） 用荧光标记抗体，再与待检标本中抗原反应那个，所形成的抗原抗体复合物在荧光显微镜下散发荧光，借此对抗原进行定性和定量。 3、免疫组化 (immunohitochemistry) 应用标记的抗体与组织或细胞抗原反应，借助形态学观察，对组织或细胞表面抗原进行定性、定量、定位检测。 4、放射免疫测定法 （radioimmunassay,RIA） 用发射性核素标记抗体或抗原进行免疫学检测。 5、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay） 将发光物质标记抗原或抗体，发光物质在反应剂激发下生成激发态中间体，当回复至稳定的基态时发射光子，通过自动发光分析仪测定管子参量，可反应样品中抗体或抗原含量。 6、免疫印记法（immunoblotting） 又称western 印记法：结合凝胶电泳和固相免疫技术，将借助电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，在应用酶免疫、放射免疫等技术进行检测。 第2节 免疫细胞检测 机体免疫功能状态的重要指标 免疫细胞来源---外周血 （3）洗淘法（panning）（4）流式细胞仪（flowcytometry,FCM） 3、淋巴细胞亚群计数 免疫荧光计数 微量细胞毒试验 1、细胞增殖试验具体方法 ①形态学观察法 ②3H-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的β射线放射活性 ③MTT法 （2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC） ——检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能 ①51Cr释放法 ②乳酸脱氢酶释放法 ③ 细胞凋亡检查法：TUNEL法（TdT dependent dUTP-biotin nick end labeling）、FACS测定法 （3）分泌功能测定 检测细胞因子分泌细胞 检测抗体形成细胞 （一）免疫球蛋白测定 1、体外用已知抗原检测相应抗体 2、用已知抗体定性、定量测定各类免疫球蛋白 （二）补体测定 免疫比浊法 ELISA RIA （三）细胞因子检测 1.免疫学测定法 鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测 ①ELISA法 ②生物活性测定法 ③聚合酶链反应（PCR）法 （三）细胞因子检测 2.生物活性测定法 原理：不同