山东10个不同种质金银花中木犀草苷含量测定.docVIP

山东10个不同种质金银花中木犀草苷含量测定 　　摘要：目的：以木犀草苷含量为指标，结合药材产量及绿原酸含量，评价山东产金银花10个不同种质的内在质量。方法：高效液相色谱法。结果：10个不同种质金银花中木犀草苷的含量为0.075％～0.221％。结论：不同种质金银花中木犀草苷的含量存在着较大差异。以木犀草苷含量结合产量及绿原酸含量，筛选出4个优良种质，1个淘汰种质，为金银花优良种质的筛选与评价积累依据。 　　关键词：金银花；种质；木犀草苷；高效液相色谱法 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2008）04-0753-02 　　 　　金银花是临床清热解毒的首选中药，道地产区山东已有300余年的栽培历史。长期的自然选择与人工选择，金银花的种质发生了明显的变异与分化，形成了很多农家品种和品系，研究表明，这些种质的形态、产量及质量均存在着较大差异[1-2]。木犀草苷具??很强的抗呼吸道合胞体病毒活性[3]。不同种质金银花之间木犀草苷的含量是否有差异尚未见报道。作者在对山东10个不同种质金银花绿原酸含量研究的基础上[4]，对其木犀草苷的含量和产量进行了研究，为金银花的种质评价和筛选积累资料。 　　 　　1仪器与材料 　　 　　Waters 2695-2996（自动进样器）监测器:二极管阵列监测器；乙腈、甲醇色谱纯，乙醇、冰醋酸分析纯，木犀草苷对照品(购自北京禾原天然产物科技公司标准品供应中心)。 　　样品于2005年5月采于山东省平邑，取自同一个地块的同一种质，在生长发育正常的居群中随机取大小基本一致的5墩，采收全部二白期花蕾，阴干。经作者鉴定，均为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾。取每墩10个花枝上的所有二白期花蕾阴干称重，计算每个花枝的一个着花节上二白期花蕾的平均重量，再根据每个枝条的着花节数以及每墩植株着花枝条的总数，计算出每墩植株花的总产量。见表1。 　　 　　2方法与结果 　　 　　2.1色谱条件Kromasil100A C18 柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相、流速、检测波长350nm参照《中国药典》；理论塔板数按木犀草苷计算不低于2000[5]。 　　2.2对照品溶液的制备精密称取木犀草苷对照品5.3mg，置棕色容量瓶中，精密加入70％的乙醇100mL，摇匀，备用。 　　2.3供试品溶液的制备取干燥药材适量，研细，过4号筛，精密称取粉末约1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇25mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz）1h，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[5]。 　　 　　2.4标准曲线的制备精密吸取木犀草苷对照品溶液，在上述色谱条件下，依次进样5、7、10、12、15、25μL，以峰面积与进样量进行回归，得线性回归方程y＝147667x＋64394，r=0.9999，线性范围为0.106～1.325μg。 　　2.5重现性考察将同一样品按2.3项下依法制成6份，依法测定峰面积，结果RSD＝2.17％，表明重现性良好。 　　2.6精密度考察按2.3项下制备供试品溶液，依法测定，连续进样6次，每次10μL，测定峰面积，结果RSD＝2.90％，表明仪器精密度良好。 　　2.7稳定性考察精密吸取供试品溶液10μL，在0、6、12、24、30、36h各进样1次，RSD＝0.28％（n＝6），表明样品在36h内稳定。 　　2.8加样回收实验取6份已知含量的金银花样品粉末约1.5g，分别加入木犀草苷对照品约1mg，按2.3项进行制备，按2.1项色谱条件进行分析，样品中木犀草苷的含量，根据公式 回收率=（C-A）/B×100%（A为样品中所含被测成分量；B为加入对照品量；C为实测值），计算回收率。平均回收率为98.92%，RSD=3.45%，表明本法具有较好的回收率。 　　2.9样品测定按2.3项下方法制备10个样品的供试品溶液，测定前用微孔滤膜过滤。取供试品溶液10μL，按2.1项下色谱条件进行测定，由回归方程计算不同种质金银花中木犀草苷的百分含量，并用SAS统计软件对结果进行分析处理，见表2。 　　实验表明，10个不同种质金银花中木犀草苷的含量有差异。按《中国药典》规定木犀草苷含量不得少于0.10％[5]，因此除种质6和19外，其他种质均符合《中国药典》的规定。 　　 　　 　　3小结与讨论 　　 　　 研究表明，金银花中两种有效成分木犀草苷与绿原酸的含量高低不具有相关性。 　　3.1优良种质4号种质木犀草苷含量约0.221％，绿原酸含量2.36％[4]，头茬花单墩药材产量109.9g，是10个种质中药材产量较高而有效成