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核磁共振分析技术 内 容 核磁共振基本原理 仪器设备介绍 一维氢谱 碳谱、杂核及二维谱 一、核磁共振基本原理 静磁场B0， I?0原子核的自旋角动量空间量子化 自旋量子数I和原子核的关系 核磁共振发展历程 1924年，Pauli提出核自旋假设。 1932年，认识到核自旋是质子自旋与中子自旋之和。质子数和中子数两者或其一为奇数时，核才有非零的核磁矩。核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR) 是指核磁矩不为零的原子核，在外磁场中存在不同能级；吸收一定频率的电磁波后，原子核发生不同核能级之间的跃迁现象。 1952年，美国斯坦福大学F.Block和哈佛大学E.M.Purcell因各自独立发现宏观核磁共振现象，获诺贝尔物理学奖。 1991年，瑞士科学家Ernst因对NMR波谱方法、傅里叶变换、二维谱技术的杰出贡献，获诺贝尔化学奖。 2002年，瑞士核磁共振波谱学家Kurt Wüthrich，因开创性应用多维NMR技术测定溶液中蛋白质的三维结构，诺贝尔化学奖。同获此奖的还有一名美国科学家和一名日本科学家。 2003年，美国科学家Paul Lauterbur和英国科学家Peter Mansfield因在磁共振成像技术方面的突破性成就，获诺贝尔医学奖。 二、仪器设备介绍 NMR谱仪分类： 液体核磁，固体核磁，核磁成像（MRI） NMR谱仪检测特点： 无损检测，灵敏度低 NMR应用范围： 化学、物理、生物、医学、材料等领域 NMR 谱仪结构 400 MHz 54mm磁体可配置探头类型 测试要求 样品要求： 纯度95%。 样品量1H谱一般5 mg， 13C 谱用量15 mg~100 mg，二维谱40 mg。 不能含铁磁性或顺磁性离子等杂质。 氘代试剂选择： 样品溶解度高，不得含不溶性杂质 与样品不发生化学反应。 残余溶剂吸收峰对样品信号没有干扰。 溶液黏度不要过高，否则分辨率不好。 5 mm核磁管中样品高度 3.5 cm 常用氘代试剂： CDCl3，D2O，DMSO-D6，CD3OD，C6D6,CD3COCD3 内标物质： 有机溶剂TMS， TMS的沸点为27℃，测试后很容易除去。 水溶剂DSS（2，2-二甲基-2-硅戊基-5-磺酸钠 ）。 大多数情况下可以有残余溶剂峰定标。 核磁管要求： 外径5 mm，长度17 cm。 不能烘箱烘干。 外壁不能有溶剂残留,不能粘贴标签。 1H NMR 13C NMR、X核和二维谱。 三.1、一维氢谱1H NMR 化学位移（化学环境） 耦合常数（自旋耦合） 积分面积（质子个数） 化学位移 影响化学位移的因素 电子效应 诱导效应 共轭效应 邻近基团的影响 磁各向异性（典型例子苯环环电流效应） 分子间相互作用（氢键和溶剂效应） 耦合常数 大小与外加磁场强度无关 1JH-X，2JH-C-H，3JH-C-C-H 1JH-X值比较大， 1JH-C 约100 Hz~300 Hz， 1JH-P可达800 Hz。 2JH-C-H值从负到正，变化较大，受取代基电负性、化合物构象、环大小及邻位?键影响。 3JH-C-C-H值约为0~20 Hz，大小与双面夹角、取代基电负性、环大小有关。 长程耦合 常见官能团耦合常数 自旋耦合体系 一级谱体系( ?v/J6) 符合2nI+1规律。 二级谱及高级谱体系( ?v/J比较小 ) AB体系，AB2体系，ABX体系，ABC体系，AA’BB’体系。 二级谱ABX耦合体系 质子积分面积 一维氢谱解析辅助方法 变温实验 重氢交换 位移试剂 介质效应 双共振 高频仪器 双共振自旋去耦 双共振NOE效应 介质效应 以CDCl3为溶剂，如果有些峰组重叠，可滴加少量氘代苯/吡啶/乙腈等溶剂，重叠的谱峰有可能分开。 低温探头 反-巴豆酸乙酯1H NMR 变 置 置 * 国家民委教育部生物技术与资源利用重点实验室大型公共仪器介绍 ——400 MHz液体核磁共振波谱仪 m为原子核的磁量子数: I, I -1, ……, -I, ?E? ?E2 Z B0 B1 B2 m=+? (?) m=-? (?) 核磁共振产生条件： 偶/奇 奇 偶 质子数 1H，13C，19F，31P 17O，11B，23Na 半整数 奇/偶 奇 2H，14N 整数 奇 偶 12C，16O 0 偶 偶 典型核 自旋量子数I 中子数 质量数 400MHz核磁共振波谱仪磁场强度为9.4T