减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定.docVIP

减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定 第4O卷第2期 2009年2月 东北农业大学 JournalofNortheastAgnculturalUniversity 4O(2):83-87 Feb.2oo9 文章编号1005—9369(2009)02—0083—05 减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定 肖妙,于志丹,马波,王君伟 (东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030) 摘要:根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV一127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物, 采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18一T,经过鉴定后测序.序列分析表明,所 获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV一127株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者 的氨基酸完全一致.然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET一30a(+),获得的阳性克隆命名为 pET一30a—Penton.将pET-30a—Penton转化E.coliRosetta,经37,1.0mmolL-IPTG诱导表达5h,SDS—PAGE 分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0ku.WesternBlot 试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性. 关键词:减蛋综