斑马鱼(danio rerio)重组cd36基因的原核表达及功能分析-prokaryotic expression and functional analysis of danio rerio recombinant cd36 gene.docxVIP

i i ii ii 斑马鱼（Danio rerio）重组 CD36 基因的原核表达及功能研 究 摘要 CD36 是一种跨膜糖蛋白，属于 B 族清道夫受体（class B scavenger receptor, SR-B）。 研究发现，CD36 在哺乳动物的很多组织和细胞中表达，参与多种生理 和病理过程，如免疫调控、脂肪类食物的味觉感受、细胞粘附、血管再生和肥胖、 动脉硬化和心肌病变等。但目前的研究工作主要集中在哺乳动物中，在鱼类中的 研究还很薄弱。斑马鱼是重要的鱼类模式生物。最近，我们对斑马鱼 CD36 基因 的组织分布、胚胎发育时期的时空表达模式及其在免疫中的作用作了初步研究。 本文在我们前期研究的基础上，对斑马鱼 CD36 基因进行了原核体外表达，并对 其功能进行了进一步研究。 首先，我们对斑马鱼 CD36 基因进行了原核体外表达。利用 PCR 技术对斑 马鱼 CD36 基因序列进行了克隆。其 cDNA 长度为 1185 bp，可编码 395 个氨基 酸的蛋白质，分子量为 46.8 kDa。将该片段同 pET-28a 原核表达载体连接，构建 了重组原核表达载体，转化 大肠杆菌 并成功进行了诱导表达。重组 CD36 蛋白 的表达部位主要在包涵体中。 其次，我们对重组 CD36 蛋白的免疫功能进行了研究。对重组蛋白 CD36 进 行了溶解、纯和透析复性。抗菌活性检测发现它对革兰氏阴性细菌大肠杆菌和革 兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌均有抑制作用。经 FITC 标记的重组蛋白可以和革 兰氏阴性细菌大肠杆菌和革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌均发生结合，提示重组 蛋白的抑菌机理可能是通过重组蛋白同细菌结合实现的。 最后，我们构建了 CD36 pCS2-TALEN 载体，为利用 TALEN 技术对斑马鱼 CD36 基因进行敲除奠定了基础。设计了一对定向突变 CD36 基因该区域的靶位 点序列，利用最新的“Unit Assembly”方法成功构建了一对 TALEN 表达载体，为 斑马鱼 CD36 的基因敲除迈出了重要的一步，并为进一步利用突变的方法研究斑 马鱼 CD36 功能及其机理奠定了基础。 关键字：斑马鱼；CD36；表达；免疫 Expression and functional analysis of CD36 gene in Zebrafish Abstract CD36 is a transmembrane glycoprotein and one of class B scavenger receptors. It is found in many mammalian tissues and cells, and participates in a variety of physiological and pathological processes, such as immune regulation, fatty foods taste experience, cell adhesion, angiogenesis and obesity. Current researches focuse on mammals, but it is still very weak in fish. The zebrafish is an important fish model organisms. Recently, the distribution of the the zebrafish CD36 gene organization, spatial and temporal expression patterns during embryonic development and its role in the immune preliminary study. In this paper, we do zebrafish CD36 gene prokaryotic expression in vitro based on our previous study,. Part of zebrafish CD36 gene was obtained by PCR,eccoding 395 amino acids with a predicted molecular mass of approximately 46.8 kDa.It is 1185bp long.we constructed the recombinant prokaryotic expression vector with pET-28a. We find most recombinant CD36 protein was in inclusion bodies