不同化感潜力水稻的pal-2-1启动子分析-analysis of pal - 2 - 1 promoter in rice with different allelopathy potential.docxVIP

HYPERLINK \l _bookmark0 附录 1 第一条链 cDNA 的合成 46 HYPERLINK \l _bookmark1 附录 2 胶回收 DNA 47 HYPERLINK \l _bookmark2 附录 3 质粒提取48 HYPERLINK \l _bookmark3 附录 4 DH5α 感受态细胞制备及转化 49 HYPERLINK \l _bookmark4 附录 5 农杆菌 EHA105 感受态细胞制备及转化 50 HYPERLINK \l _bookmark5 附录 6 蛋白的胶内酶解51 HYPERLINK \l _bookmark6 致谢52福建福建农林大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1摘 要 利用水稻化感作用来控制田间杂草是一种环境友好型的可持续农业技术。水稻化感作用形成与功能基因的表达调控密切相关，而启动子则是基因表达调控的 核心区域。化感水稻 2 号染色体的第一个苯丙氨酸解氨酶基因(PAL-2-1) 是水稻 化感作用的一个功能基因，该基因在稗草胁迫下的不同化感潜力水稻中存在明显 的表达变化差异。据此，本研究通过启动子 5’端侧翼缺失以及固相 DNA 筛选互 作蛋白的方法研究化感水稻 PI312777 与非化感水稻 Lemont 的 PAL-2-1 基因在稗 草胁迫下表达变化存在差异的原因。通过克隆两种水稻的 PAL-2-1 启动子并进行测序分析，结果显示两种水稻的 PAL-2-1 启动子仅存在 2 个碱基的差异，因而推测 PAL-2-1 启动子序列碱基的微弱 差异不会是稗草胁迫下两种水稻的该基因表达发生明显差异的原因；对启动子的 功能区域分析发现含有大量的光反应元件、增强子、抗氧化反应元件、激发子反 应元件、激素反应元件等。启动子 5’端侧翼缺失试验结果还显示，两种水稻的 PAL-2-1 启动子的每个启动子缺失片段都能启动 GUS 报告基因的表达。因此进一 步认为结合于启动子上的调控因子的表达强度可能是导致 PAL-2-1 基因在两种水 稻中表达差异的原因。进一步通过固相 DNA 结合法分别与筛选化感水稻 PI312777、非化感水稻 Lemont 的 PAL-2-1 启动子的结合蛋白，结果显示锌指结构蛋白、组蛋白 H3、热 激蛋白、抗病相关蛋白等均能与 PAL-2-1 启动子结合，其中锌指结构蛋白和组蛋 白 H3 是具有转录调控、修饰的作用，进而运用荧光定量 PCR 检测稗草胁迫下化 感水稻 PI312777 与非化感水稻 Lemont 的编码锌指结构蛋白和组蛋白 H3 的基因 的表达，结果显示，两个基因在两种水稻中均上调表达，但是，其在化感水稻 PI312777 的上调表达倍数高于非化感水稻 Lemont。研究结果表明稗草胁迫下不同化感潜力水稻的 PAL-2-1 的表达变化存在明显 差异与其启动子碱基序列的微弱差异无关，而可能与调控该启动子的锌指结构蛋 白转录因子及能够引起蛋白乙酰化的组蛋白 H3 的表达强弱有关。关键词：水稻， 化感作用，启动子 5’端侧翼缺失， 固相 DNAAbstractUsing rice allelopathy to control weeds in paddy fields is a sustainable bio-engineering technique of the 21st century; Regulation of gene expression is the core formation of rice allelopathy. The first rice phenylalanine gene (PAL-2-1) which locates in chromosome 2 is a functional gene of rice allelopathy. Attention is paid to finding out the obvious differences expression of PAL-2-1 in different allelopathic rice when they are under the stress of barnyard grass by two kinds of methods such asa series of 5’-flanking deletion of PAL-2-1 promoter and DNA-fixed .Only two bases are found that give arise to the different sequence of PAL-2-1 promoter in rice PI312777 and Lemont by sequencing, w