大菱鲆免疫球蛋白d重链基因的克隆与表达分析-cloning and expression analysis of immunoglobulin d heavy chain gene in turbot ( scophthalmus maximus ).docxVIP

大菱鲆免疫球蛋白 D 重链基因的克隆与表达研究 摘 要 本论文克隆了大菱鲆 mIgD 基因 cDNA 全序列，序列特性分析显示其含有 免疫球蛋白家族所有的经典结构域。RT-PCR 分析该基因在不同组织内的差异 表达情况，实时荧光定量 PCR 检测鳗弧菌刺激后前肾中该基因的时空差异表达 情况，推测鱼类 mIgD 在免疫信号传导及体液免疫防御中均可能起着重要作用。 在序列分析的基础上对其进行分段表达，构建 mIgD 的δ区重组表达载体，并 制备了其多克隆抗体。利用其与大菱鲆外周血白细胞间接免疫荧光实验 ，结果 显示两者发生了特异性结合，说明了外周血白细胞的细胞膜上存在膜结合 型 mIgD。本论文主要包括以下三部分： 1 大菱鲆免疫球蛋白 D 重链基因的克隆 设计简并引物扩增 大菱鲆免疫球蛋白 D 重链基因的中间保守序列，通 过 RACE 技术获得 mIgD cDNA 序列，序列全长 3357 bp，含一个 2997 bp 的开放 阅读框，编码 999 个氨基酸，基因结构为 VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。重 链恒定区δ1~δ7 氨基酸序列同源比对结果显示其与庸鲽 （78 %）、鳜鱼（71 %）、 牙鲆（68 %）具有较高的同源性，多序列比对结果显示大菱鲆 mIgD 的每个δ 恒定区内均存在色氨酸与半胱氨酸保守位点。利用邻位相连法构建硬骨鱼类 免疫球蛋白系统