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中学生物学习中筛选问题例析 　　“筛选”是生物学中培育生物新类型常用的手段，在高中生物学习中常常遇到有关筛选的问题，现在进行归纳例析。 　　 　　1　单克隆抗体制备中的筛选问题 　　 　　在单克隆抗体制备过程中，有两次的筛选过程，第一次是选出杂交瘤细胞(用选择性培养基)；第2次是进一步选出能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。 　　利用杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理是根据以下三个原则： 　　①淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说，即一种克隆只产生一种抗体； 　　②细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性； 　　③利用代谢缺陷补救机理筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养增殖，制备所需的单克隆抗体。 　　【例1】已知细胞合成DNA有D和s两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中虽有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有s途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙醇促融，获得杂种细胞 　　(1)试管中除融合的杂种细胞外，还有 　　种融合细胞 　　(2)设计一方法(不考虑机械方法)，从培养液中分离出杂种细胞，并说明原理 　　方法： 　　原理： 　　解析：(1)在细胞融合过程中两个细胞之间是随机进行的，两个骨髓瘤细胞之间或两个淋巴细胞之间或两个不同的细胞之间是随机进行的，因此有三种融合方式。 　　(2)试管中细胞共有5种(只考虑两个细胞的融合)：效应B淋巴细胞及其自身融合的细胞、鼠骨髓瘤细胞及其自身融合的细胞、杂交瘤细胞。因为效应B淋巴细胞中DNA的复制有D途径和s途径，但本身不会连续增殖，故培养一段时间后效应B淋巴细胞及其自身融合的细胞全部死亡；鼠骨髓瘤细胞内DNA的复制只有D途径，而D途径可以被氨基嘌呤阻断，故加入氨基嘌呤后培养一段时间，鼠骨髓瘤细胞及其自身融合的细胞也会死亡；只有效应B淋巴细胞和鼠骨髓瘤细胞结合后产生的杂交瘤细胞既可以无限繁殖，又具有s途径，所以可以连续繁殖而被筛选出来。 　　答案：(1)2 　　 　　(2)培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞：加入氨基嘌呤后.使D合成途径阻???.仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖.但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。 　　 　　2基因工程中的筛选问题 　　 　　在基因工程中，利用运载体上的标记基因可以筛选出导人了目的基因的受体细胞。标记基因常有抗抗生素基因或荧光蛋白基因等。 　　【例2】研究人员想将生长激素基因通过质粒介导进入大肠杆菌细胞内，以表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因不插入到基因A、B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。则筛选获得“工程菌”的培养基中的抗生素首先应该( 　　) 　　A.仅有链霉素 　　B.仅有抗氨苄青霉素 　　c.同时含链霉素和抗氨苄青霉素 　　D.无链霉素和抗氨苄青霉素 　　解析：在基因工程中，目的基因是否导入受体细胞中，主要根据载体质粒上的标记基因确定的。根据题意，目的基因没有插入到基因A、B中，说明这两个标记基因没有被破坏，抗链霉素基因和抗氨苄青霉素基因都能表达，所以应该用同时含有链霉素和抗氨苄青霉素的选择培养基进行筛选。 　　参考答案：C。 　　 　　3营养缺陷型菌株的筛选 　　 　　营养缺陷型突变株的筛选有多种方法。不同的微生物菌株选用的方法不同， 　　①抗生素法。某些抗生素能杀死正生长繁殖着的微生物，而对处于休止状态的微生物无杀伤作用。用加有青霉素的培养基来选择细菌的营养缺陷型就是由于青霉素是细菌细胞壁的合成抑制剂，利用其可杀死正在繁殖的细菌的性质。 　　②菌丝过滤法。适用于放线菌、霉菌等丝状微生物。在基本培养基中野生型孢子能萌发长成菌丝体，而营养缺陷型孢子则不生长。将经诱变处理的孢子接种于液态基本培养基中，振荡培养10 h-12 h，使原养型萌发(以肉眼刚能看见菌丝为度)，然后以滤纸、棉花或玻璃过滤漏斗过滤，菌丝被滤除，未萌发的缺陷型孢子能顺利通过，从而达到富集营养缺陷型的目的。 　　③逐个测定法(点种法)。把经诱变处理并淘汰野生型后的菌液在完全培养基上涂布分离，将培养后长出的每一个菌落分别点种在基本培养基和另一个完全培养基上，凡在基本培养基上不能生长而在完全培养基的相应位置上能生长的菌落，表明其为营养缺陷型。 　　④夹层培养法。经诱变处理后的菌液，稀释后与基本培养基混匀并倾入平皿中，待凝固后，再加上一薄层不含菌的基本培养基。培养后在皿底将长出的菌落做上标记，然后加上一层完全培养基，再经培养后，新出现的菌落多数是营养缺陷型。此法适用于兼性厌氧的细菌。 　　⑤影印法。将