IL-17在单纯疱疹病毒性角膜基质炎中作用-论文.docVIP

·中文论述摘要· IL-17在单纯疱疹病毒性角膜基质炎中的作用 目 的 HSK（herpetic stromal keratitis ，HSK）是人类主要的致盲性眼病之一，是一种由CD4+T细胞介导的免疫病理性疾病，但目前HSK的发病机制尚不完全清楚，对其治疗的有效措施少，本研究观察了IL-17在单纯疱疹性角膜基质炎模型中的表达情况，以及在给予HSK小鼠抗IL-17抗体治疗后角膜炎症反应的变化，并且探讨了IL-17在HSK疾病过程中的作用机制，为进一步研究治疗HSK的有效措施提供新的依据。HSK小鼠模型的制备：将1.0×106空斑单位的单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type 1, HSV-1）KOS毒株接种于BALB/C鼠的角膜上,建立HSK动物模型。 2、显微镜下在各时间点（第1、3、7、10、14及21d），观察小鼠的角膜混浊程度及新生血管化程度。 3、免疫组织化学染色观察IL-17在角膜中的表达。 、用流式细胞仪检测各时间点（第1、3、7、10、14及21d）小鼠外周血中IL-17在CD4+T细胞上的表达。 PSS17.0统计软件对数据进行分析。 1、疾病程度观察：观察可见角膜混浊程度及新生血管化程度在第10-14d最严重，14d之后逐渐好转2、免疫组织化学染色发现HSK小鼠角膜基质层炎性细胞、角膜成纤维细胞胞浆、上皮细胞及内皮细胞胞浆中可见大量IL-17阳性表达。 、流式细胞学检测发现IL-17在HSK小鼠外周血CD4+ T细胞表达升高，在接种后第3d时表达量最高。HSK小鼠模型的制备：同第一部分。 抗IL-17单克隆抗体腹腔注射：PBS组、IgG2A抗体组、抗IL-17抗体组小鼠分别在接种病毒当天及接种病毒后第3d，给予腹腔注射PBS、IgG2A抗体、抗IL-17单克隆抗体。 显微镜（第1、3、7、10、14及21d），观察各组小鼠的角膜混浊程度及新生血管化程度。 4、HE染色观察各组小鼠角膜的病理学改变。 5、用流式细胞仪检测正常小鼠及各时间点（第1、3、7、10、14及21d）各组小鼠外周血中TNF-α及NF-κB p65在CD4+T细胞上的表达。 PSS17.0统计软件对数据进行分析。 1、疾病程度观察：各组角膜混浊程度及角膜新生血管化程度均在第10-14最严重。PBS组及IgG2A抗体组疾病严重程度接近，抗IL-17抗体组的疾病严重程度明显比前两组轻。 2、角膜组织HE染色观察发现HSV-1接种后IgG2A抗体组小鼠及PBS组小鼠角膜可见角膜上皮层完整，基质层高度水肿增厚，有大量炎性细胞浸润，可见新生血管生成。抗IL-17抗体组角膜炎症反应程度明显比前两组轻。 3、流式细胞学检测发现在小鼠感染HSV-1病毒后，IgG2A抗体组和PBS组TNF-α及NF-κB p65的表达均有明显升高，抗IL-17抗体组较前两组仅有轻微升高。 IL-17在HSK小鼠角膜及外周血CD4+T细胞上有表达，且在感染早期呈现高表达状态。IL-17可能通过上调促Th1型细胞的细胞因子TNF-α的表达，并且大量激活NF-κB促进了HSK的炎症反应。 IL-17；角膜炎；疱疹性；TNF-α；NF-κB Objective Herpetic stromal keratitis (HSK)， one of the humans leading causes of blindness, is a immune-mediated inflammatory disease induced by CD4+T cell.However, the pathway of HSK is not yet known. Treatment of HSK remains difficult with few effective specific therapies available.We designed the current study to determine the expression of IL-17 on HSK, the alter of virus-induced corneal inflammation after anti-IL-17 antibody （Ab） treatment during murine HSK. We probe into pathway of IL-17 in HSK which could provid some new proofs for the further study of HSK effective therapies. PART 1