2011组培实习指导.docVIP

《植物组织/细胞技术》 课程实习指导 X生物081-082班 2011年5月 实习安排与要求 一、实习安排 1.实习时间：本次教学实习时间3天，具体时间安排为2011年5月25日至27日； 2.实习地点：生物技术实验室；校园。 3.实习内容与进度： 时间 教学实习内容 实习地点 指导教师 5.25上午 X生物081，实习所需试剂准备， 实验楼D302 杨靖；孙海燕 5.25下午 X生物081，原生质体的游离与培养， X生物082，植物快繁体系外植体选择与预处理 实验楼D302，304 校园 杨靖；孙海燕 5.26上午 X生物082，实习所需试剂准备， 实验楼D302 杨靖；孙海燕 5.26下午 X生物082，原生质体的游离与培养， X生物081，植物快繁体系外植体选择与预处理 实验楼D302，304 校园 杨靖；孙海燕 5.27上午 X生物082，植物宝宝培养， 植物快繁体系建立 实验楼D302，304 杨靖；孙海燕 5.27下午 X生物081，植物宝宝培养， 植物快繁体系建立 实验楼D302，304 杨靖；孙海燕 二、实习成绩考核 实习成绩考核采用百分制记录，总成绩由考勤成绩、实习报告成绩、实习操作成绩组成。其中，考勤成绩占总成绩的20％，实验操作成绩占40%，实习报告成绩占总成绩的40%。 三、实习要求 1、指导教师全面监管实习过程中的纪律，负责实习时间安排与安全防护；各行政班班长、学习委员以及各实习小组组长负责具体实施。 2、实习过程中实行组长负责制：每班学生分为6组，每组5-6人，每组推荐组长1名，对本组组员负责召集、组织、安全监督和出勤记录； 各班班长和学习委员对本班各组进行统一管理，对各自的班级负责。 3、实习过程中要遵从指导教师的统一安排，做到遵守纪律，井然有序。树立良好的时间观念，遵守实习进度安排，不迟到，不早退。 遇到问题及时与指导教师联系：杨靖（手 孙海燕（手 4、在实习过程中要按章操作，注意保护所用仪器，同时要注意自身的人身安全，特别是对高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器等易造成人身伤害的仪器，使用一定要小心进行；对升汞等有毒试剂的处理也要特别小心。 5、实习前和实习过程中，进行必要的文献资料查阅和理论知识准备；理论联系实际，实习中要勇于发现问题，积极分析问题和解决问题。 6、整个实习过程要严肃认真，科学求是，确保实习质量。 7、实习结束后，根据实习要求、实习内容、自己的感受，进行认真整理，及时详细地写出实习报告。 实习一 原生质体分离与培养 一、实验原理 植物原生质体是除去了细胞壁的仅为质膜所包围的的裸露细胞。植物的细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质构成。一般而言，纤维素占到细胞壁干重的25%-50%，半纤维素占到细胞壁干重的53%左右，果胶质一般占细胞壁的5%左右，根据不同的植物细胞特性，选择不同的纤维素酶、果胶酶（有的材料需加入半纤维素酶）可有效的去除细胞壁，而不伤害细胞本身，从而获得大量的具有活力的原生质体。 由于原生质体内部与外界环境间仅隔一层质膜，因此，原生质体分离和培养过程中必须保持在渗透压平衡的溶液中才能保持其完整性和活力，所以在原生质体的分离、纯化和培养的早期都应当给予适当的渗透保护。 由于原生质体具备了完整的细胞器和细胞结构，与植物细胞一样具有全能性，在合适的离体培养条件下具有分裂分化和再生成为完整植株的能力。植物原生质体培养就是通过原生质体的分离、纯化、培养，得到再生植株的过程。 植物原生质体的分离与培养具有重要意义：在基础研究方面，可利用原生质体研究细胞壁的再生，研究质膜的结构与功能以及在能量转换、物质转换以及信息传递等方面的作用；研究病毒侵染、复制的机理。在植物生理学研究方面，原生质体成为研究植物生长调节物质的作用、植物代谢以及其他生理问题的工具。利用原生质体易破碎的特点可以分离得到大量而完整的细胞器用于各种研究。由于原生质体具有全能性及能摄取外源细胞器、细菌、病毒、质粒及DNA大分子等特点，因此是进行遗传转化研究的理想工具。原生质体由于无壁，所以能超越细胞间的不亲和障碍，便于进行各种远缘种间细胞杂交，可通过融合等技术将外源遗传物导入培育新品种。 学习和掌握原生质体制备和培养的方法。 三、实验器材 超净工作台、显微镜（6台）、高压灭菌锅、摇床、低速离心机（配10ml带盖具刻度离心管）、微孔滤膜过滤器、不锈钢网(200-250目)等。 每实验组所需要的物品见表4-1。 四、实验药品与材料 1．试剂溶液 （1）酶混合液：先配酶储备液/洗液(CPW+10%甘露醇)灭菌待用，实验时再按比例加入纤维素酶（1%，Onozuka R-10，JapanPectinase、ServaCPW+10%甘露醇。CPW溶液：KH2P04