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不同免疫剂量与次数对猪瘟抗体水平影响试验报告 南金鱼 （甘肃省酒泉市畜牧服务中心 甘肃 酒泉 735000） 酒泉市肃州区南环西路20号 猪瘟是由猪瘟病毒感染猪而引起的一种急热性、高度传染性疾病，以其流行广泛、传染性强、病死率高而长期威胁着养猪业的健康发展。20多年来猪瘟疫苗的推广使用，使该病在我市得到了有力的扼制，为规模化养猪发展鉴定了基础。但笔者在近几年的工作中发现以猪瘟为诱导激发猪圆环病毒病、蓝耳病、病毒性痢疾等疾病混合感染发病的病猪逐年增加，且在临床症状和病理解剖特征上，发病初期多数表现为非典型性猪瘟病状，后期症状随病因增多呈现复杂化。通过对发病猪及饲养环境的流行病学调查，发现病猪曾不同程度接种过猪瘟疫苗，但发病初期或多或少均表现出猪瘟症状，因此有必要对全市猪瘟免疫抗体进行全面抽样监测，掌握免疫后体内抗体水平，为科学制定防疫计划提供依据。 1 实验设计 1.1 实验方法 1.1.1 试验原理：利用凝集反应原理，用己知血凝抗原检测未知血清抗体，经反应后在一定条件下形成抗原抗体复合物的方法（猪瘟正向间接血凝试验）检测体内抗体水平。 1.1.2 判定标准： 1.1.2.1 阴性血清和稀释液孔对照标准：阴性血清对照1:16孔和稀释液对照孔均无凝集(血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点)或少量凝集(血球大部沉于孔底，边缘稍有少量血球悬浮)。 1.1.2.2 阳性血清孔对照标准：阳性血清对照1:2～1:256各孔应出现“++～++++”凝集(少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内)。 在1.1.2.1和1.1.2.2两项条件均成立的前提下，观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价，判断猪群免疫抗体效价达到1:16(即第4孔)呈现“++”凝集为免疫合格。 1.2 实验材料 1.2.1 供试动物：在全市2个百头养猪场和10户养猪大户中随机抽样日龄在80天左右，并至少在20日前免疫过一次猪瘟疫苗的461头猪做为抗体监测供试动物。 1.2.2 实验器材：96孔110。V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板；微量移液器(20-200微升)取液塑料咀；微量振荡器；恒温箱等。 1.2.3 实验试剂：猪瘟血凝抗原（批号070826，效价1：1024）；猪瘟阴性对照血清（批号070529）；猪瘟阳性对照血清（批号070622）；稀释液（批号070627）以上试剂均为中国农科院兰州兽医研究所生产，免疫用苗为市面上销售的猪瘟兔源乳兔组织活疫苗。 1.3 实验步骤 1.3.1 抽样登记：对供试动物按照耳标号，公母、猪瘟免疫时间、免疫剂量、免疫次数等类别做详细登记。同时，逐头采集血液各2毫升，分离血清保存。 1.3.2 抗体检测：采用猪瘟正向间接血凝方法对采集的461份血清进行抗体水平检测，并按照免疫次数和剂量相同原则对采集到的461份血清及血清对应的猪分为A、B、C、D、E、F六个大组，计算出免疫保护率。 1.3.3 强化免疫：每大组猪随机分成1、2、3三个小组，按照1头份/头、2头份/头、3头份/头三类剂量标准分别对每大组对应的三小组猪进行一次猪瘟强化免疫。 1.3.4 强免后抗体检测：强化免疫20日后再次采血进行免疫抗体检测，计算出免疫保护率并进行抗体水平比较。 抗体水平检测结果表 常规免疫后抗体水平检测 强化免疫后抗体水平检测 保护率比较 免疫情况相同类分组 猪(头) 免疫情况(次数与头份/头/次） 有效保护头数(头) 保护率 随机分组 猪(头) 强化免疫剂量（头份/头） 有效保护头数(头) 分组保护率 保护率 A 62 1次1头份 15 24% A1 20 1 9 45% 73% +48% A2 21 2 15 71% A3 21 3 21 100% B 88 2次1头份 46 52% B1 30 1 21 70% 86% +34% B2 29 2 26 90% B3 29 3 29 100% C 60 1次2头份 37 62% C1 20 1 16 80% 88% +27% C2 20 2 17 85% C3 20 3 20 100% D 76 2次2头份 54 71% D1 26 1 22 85% 93% +22% D2 25 2 24 96% D3 25 3 25 100% E 106 1次3头份 100 94% E1 35 1 35 100% 100% +6% E2 36 2 36 100% E3 35 3 35 100% F 69 2次3头份 69 100% F1 23 1 23 100% 100%