甘露糖受体在哮喘大鼠模型中作用的分析-analysis of the role of mannose receptor in asthma rat model.docxVIP

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2018-05-30 发布于上海
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甘露糖受体在哮喘大鼠模型中作用的分析-analysis of the role of mannose receptor in asthma rat model

中英文缩略词一览表MRmannosereceptor甘露糖受体AMsalveolarmacrophages肺泡巨噬细胞ASMCsairwaysmoothmusclecells气道平滑肌细胞OVAovalbumin卵清蛋白RealTime-PCRrealtimepolymerasechainreaction实时定量聚合酶连反应BALFbronchialalveolarlavagefluid支气管肺泡灌洗液MD-(+)-mannose甘露糖RmannosereceptorsiRNA甘露糖受体小干扰RNAAPCantigen-presentingcells抗原递呈细胞FITC-dextranFluoresceinisothiocyanate-dextran异硫氰酸荧光素-葡聚糖中文摘要第一部分甘露糖受体在哮喘大鼠肺组织中的表达变化研究目的研究哮喘模型SD大鼠肺组织中甘露糖受体基因和蛋白表达水平的变化。材料与方法建立哮喘SD大鼠模型。应用免疫组织化学和Western-blot方法检测肺组织中甘露糖受体（MR）蛋白表达水平。应用RealTime-PCR方法检测肺组织中MR基因表达水平。实验结果哮喘组大鼠肺组织中MR基因和蛋白表达水平均较对照组显著升高（P＜0.05）。结论哮喘组大鼠肺组织中MRmRNA和蛋白表达均较对照组明显增高，提示MR可能与哮喘的发病机制有关。关键词肺组织，甘露糖受体，哮喘第二部分甘露糖受体在哮喘大鼠模型肺泡巨噬细胞和气道平滑肌细胞中的表达变化及其对肺泡巨噬细胞内吞活性的影响研究目的1、研究SD大鼠在哮喘状态下，肺泡巨噬细胞（AMs）甘露糖受体的表达变化，及其对肺泡巨噬细胞内吞活性的影响。2、研究SD大鼠在哮喘状态下，气道平滑肌细胞（ASMCs）甘露糖受体的表达变化。材料与方法建立哮喘SD大鼠模型，麻醉后行支气管肺泡灌洗，分离并培养肺泡灌洗液（BALF）中AMs，处死后培养原代气道平滑肌细胞，取3~5代ASMCs。实验分组：（1）对照组（N组）：即为正常对照组大鼠细胞，无任何干预刺激；（2）哮喘组（A组）：即为哮喘组大鼠细胞，不加任何干预刺激；（3）哮喘+白细胞介素4（IL-4）组（A+I组）：哮喘组大鼠细胞加入10μg/ml重组大鼠IL-4刺激24小时；（4）哮喘+D-(+)-甘露糖（mannose）组（A+M组）：哮喘组大鼠细胞加入50μmol/mlD-(+)-mannose刺激24小时。（5）哮喘+甘露糖受体小干扰RNA组（A+R组）：哮喘组大鼠细胞20μmol/mlMRsiRNA刺激24小时；（6）哮喘+白细胞介素4+D-(+)-甘露糖（mannose）组（A+I+M组）：哮喘组大鼠细胞同时加入10μg/mlIL-4和50μmol/mlD-(+)-mannose刺激24小时。应用免疫荧光方法检测各组细胞中MR蛋白水平的表达；Real-TimePCR检测各组ASMCs中MR基因水平的表达变化；流式细胞术检测各组AMs内吞活性的改变；ELISA检测支气管肺泡灌洗液（BALF）上清中IL-4的含量。实验结果1、对比对照组，哮喘组大鼠BALF上清中IL-4的含量明显升高，差异具有统计学意义（p＜0.01）。2、对比对照组，哮喘组、哮喘+M组大鼠AMsMR蛋白水平表达均升高，差异均具有统计学意义（p＜0.05）；对比哮喘组大鼠，AMs经IL-4干预后，MR蛋白水平表达较对照组AMs增加（p＜0.01）；经D-(+)-mannose干预后AMsMR蛋白水平表达无明显变化；经MRsiRNA干预后AMsMR蛋白水平的表达降低，且差异有统计学意义（p＜0.05）；经D-(+)-mannose和IL-4干预后且AMsMR蛋白水平的表达增加，但差异无统计学意义（p＞0.05）；3、对比对照组大鼠，哮喘组大鼠AMs的内吞活性升高，且差异有统计学意义（p＜0.05）；对比哮喘组大鼠，AMs经IL-4干预后，内吞活性升高（p＜0.05）；D-(+)-mannose干预后AMs的内吞活性降低，且差异有统计学意义（p＜0.05）；经MRsiRNA干预后AMs的内吞活性降低（p＜0.05）；经D-(+)-mannose和IL-4干预后且AMs的内吞活性降低，但差异无统计学意义（p＞0.05）。4、对比对照组，哮喘组、哮喘+M组大鼠ASMCsMR基因和蛋白水平表达均升高，差异均具有统计学意义（p＜0.05）；对比哮喘组大鼠，ASMCs经IL-4干预后，MR蛋白（p＜0.01）和基因水平（p＜0.05）表达均增加；经D-(+)-mannose干预后ASMCsMR蛋白和基因水平的表达无明显变化；经MRsiRNA干预后ASMCsMR的蛋白（p＜0.01）和基因（p＜0.05）水平表达降低；经D-(+)-mannose和IL-4干预后且ASMCsMR的