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第四章 有害物质的测定;三、有害元素的测定 （一）铅的测定 1、双硫腙比色法 ①原理：样品经消化后，在pH=8～9时Pb2+ + 双硫腙→红色螯合物，可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶剂萃取，加入盐酸羟胺、氰化钾、柠檬酸铵，可防止Fe、Cu、Zn等干扰，比较颜色深浅可测Pb浓度 ②测定 吸取10μg/ml Pb标准溶液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5ml分液漏斗中，加入1％HNO3 20ml加入柠檬酸铵/盐酸羟胺/氰化钾/三氯甲烷于λ=510nm测A 同样测待测液，绘制标准溶液 2、原子吸收分光光度法（259-262）;四、黄曲霉毒素AFT B1的测定（P236-239) （一）方法原理（薄层色谱法） 经有机溶剂提取、净化、浓缩，经薄层色谱分离，在365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，据薄层板上显示荧光的最低检出量测定黄曲霉毒素B1的含量。 （二）样品预处理 1、提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油醚脱除。用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 2、净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT, 采用液—液分配萃取法 3、浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液 （三）样品测定 1、薄层板的制备 选择吸附剂（硅胶G） 加水成糊，涂布薄层 2、点样（P238) 3、展开 4、观察 5、验证试验 6、定量（四）计算 (239) XB1 = (0.0004×1000) / [(V1×w) / V2]; 食品分析方法的建立 食品分析方法的建立主要从两个方面考虑 1、样品处理 是食品分析的前提 应根据不同样品采用不同方法进行样品处理，采取的措施：分离、掩蔽 A.待测组分的性质 如黄曲霉毒素AFT B1,难溶于水、己烷、戊烷、石油醚、乙醚 易溶于氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、油对光、热、酸稳定,对碱、氧化剂不稳定,在365nm紫外光照射下（激发λ=425nm） B.被测食品样品的特征 根据不同食品样品的不同特征，采取相应的样品处理方法;提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油醚脱除。 用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT,采用液—液分配法,色谱柱分离 浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液;2、选择适宜的测???方法 ①建立测定方法的依据 根据待测组分的性质特点及要求进行选择 ②建立分析方法的原理及技术 A.分离方法、分析方法的确定 一般采用提取、净化、浓缩步骤 如：AFTB1可采用荧光分光光度法进行测定。 激发λ=365nm，发射λ425nm 可采用薄层色谱法进行定性、定量分析。关键是选择良好的吸附剂（硅胶G）和适宜的展开剂（乙醚、丙酮+氯仿） B.进样量的确定 稀释定量：样液中AFTB1荧光点强度与AFTB1标准点最低检出量（0.0004μg）的荧光强度一致（5μg/Kg）若不一致，再稀释至一致为止。 C.论证所用方法的可靠性 通常采用测定回收率方法。还可与仲裁方法（或标准方法）比较。（如不溶性膳食纤维测定） ;一、相关食品质量标准;;表2 罐装植物蛋白质饮料微生物指标。??? ; 二、食品微生物常规检验内容与步骤;三、菌落总数检验;检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎以后，放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min-100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 ; （2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 ; （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46 ℃ 营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）℃）水浴锅内保温]注入平皿15mL-20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入