第六篇 章 基因工程寄生虫疫苗 生物制品学 .pptVIP

第七章 基因工程寄生虫疫苗Parasite Vaccine By Gene Engineering;寄生虫与宿主的关系保持平衡是在长期进化过程中逐步形成的。 经过自然选择宿主逐渐形成有效的免疫反应以防范寄生虫的毒害作用。 通过高度自然选择，一些种群的寄生虫和宿主关系不相适应，难以平衡逐步消失。而另一些种群在进化过程中获得某些保护自己而不被宿主清除的功能，即所谓寄生虫的免疫逃避机制。 ;一.对寄生虫疫苗研究成功的关键（key of success ）： 1.包括选择免疫应答难以作用的寄生部位； 2.寄生虫在宿主体内不同发育阶段表现抗原特异性改变，从而使获得性免疫力有严格的阶段（或期）特异性。各阶段（期）因其不同的表面抗原而避开了前一阶段引起的宿主免疫效应机制的伤害。寄生虫表面抗原变异在锥虫，疟原虫，巴贝虫等致病性原虫表现更为明显。;3.寄生虫在抗原变异，抗原模拟和寄生虫摄入宿主DNA和获得宿主蛋白或以宿主抗原伪装自己方面也表现出非常复杂而有效的免疫逃避机制。但是，任何一种寄生虫在宿主体内长期存活的免疫逃避机制均未能完全搞清楚。仍是一个值得深入研究和探讨的课题。;;第二节 基因工程寄生虫疫苗的研究现状 （Research status of parasite vaccine by gene engineering） 一.疟疾疫苗(maria vaccine) 世界上每年3-5亿人口感染人疟，1.5-3百万人死于疟疾。大多数严重发病和死亡发生在儿童和孕妇，主要是恶性疟（由恶性疟原虫感染引起）。 其流行原因如下： ①疟原虫抗疟药的抗性呈上升趋势； ②媒介蚊对常用杀虫剂抗性的产生即所谓抗性蚊的出现和扩散； ③人口的迅速增长和人口流动，特别是对疟疾无免疫力人口迁移，使疟疾问题越来越严重，导致疟疾在世界范围持续地流行。;疟原虫复杂生活史的不同发育阶段中包括数种潜在保护性阶段（期）特异性抗原，为宿主有效免疫应答提供多个靶子。 这些抗原是三种特定途径研究疫苗的基础。 红前期包括肝期的子孢子疫苗或肝内期疫苗，无性期天然血液期疫苗，传播阻断疫苗针对配子体，配子或蚊体内后期。 ;被感染蚊接种的子孢子在血液循环1h后，进一步发育需入侵肝细胞，在细胞内增殖，或裂体增殖（schizogong），随后释放数千裂殖子(merozoites)，入侵红细胞。因为单一子孢子感染能导致严重血液期感染，抗子孢子疫苗必须是100%有效才有实用价值。 ;最近报导了经较大改进的亚单位疫苗的免疫效果。他们用恶性疟原虫环子孢子蛋白结合经选择能加强免疫应答的佐剂制成抗原制剂。制剂配方为CSP和B型肝炎表面抗原（HBsAg）以油-水均化制成，再加免疫激活佐剂（mono—phosphoryl-lipid A和QS21）。这种疫苗在大多数受试者产生对疟疾感染完全抵抗力及高水平抗子孢子抗体滴度，提示有一种与体液免疫相关的保护性作用。;疟疾疫苗研制的策略之一是预防活疟原虫从肝内释放。这种疫苗很可能保护人免发疟疾的全部临床症状。约氏疟原虫（P . yoelli）鼠疟模型所获结果表明，编码P . yoelii CSP或17kDa肝期和红细胞期蛋白的质粒DNA疫苗对诱导针对感染的肝细胞保护性的细胞毒CD8+T细胞应答是有效的（Ho- ffman 1997）。 ;传播阻断途径针对蚊体内疟原虫有性发育期，因此减少疟疾的传播。血餐中获得的抗体与靶抗原反应，阻断受精（fertilization）及其后在蚊体肠内的发育。 因此，传播阻断疫苗的目的是预防蚊子变成传染性蚊，从而减少疟疾传播。 ; 满意的保护性抗原（或表位）组合在一起作为疫苗候选抗原，再进行其编码基因的克隆和表达。与单一成分的阶段（或表位）特异抗原疫苗比较，一种多成分，多阶段和多价的Pf疫苗将更为有效。 利用基因工程的常规方法，将目的抗原基因插入表达载体（真核质粒表达载体），在体外利用工程菌大量扩增，再分离纯化带有抗原基因的质粒DNA作为核酸疫苗，采用不同的方法将核酸导入体细胞。对这一项新的疫苗研究技术，它能全面诱导机体的体液和细胞免疫应答。;此外，构建疟疾多阶段（期），多价，多表位复合基因DNA疫苗也取得一定进展。将疟原虫不同发育阶段（期）不同抗原的编码DNA序列（多价）拼接，从而拓宽宿主的免疫应答面 。;二.血吸虫病疫苗（schistosomiasis vaccine） 血吸虫病是一种慢性的，严重危害人民健康的人畜共患寄生虫病。 世界上2亿人口受血吸虫病危害，每年约有50万人死于血吸虫病。 10年前血吸虫安全有效的口服新药吡喹酮广泛应用，但易感动物和人群感染血吸虫后能产生对再感染的抵抗力和“伴随免疫”（concomitant immunity）。;已鉴定出许多对实验血吸虫病有保护性的抗原。这