rhuCD40L对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.docVIP

　　rhuCD40L对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用 作者：朱小朝 周广军 时坤 穆向明 【摘要】目的：通过动物体内实验研究证实rhuCD40L对人结肠癌的治疗作用，从而进一步探讨其抗肿瘤机制。 方法：将皮下接种HT-29人结肠癌细胞后建立人结肠癌模型的20只裸鼠随机分为二组，治疗组以rhuCD40L作皮下注射；对照组以生理盐水作皮下注射，定期观察裸鼠的生活状况并测量其体重，治疗5周后处死裸鼠并取瘤，测量两组瘤大小及瘤重，并比较结果。 结果：20只裸鼠全部成瘤，实验过程中所有裸鼠生活状况均良好，无一裸鼠死亡；对照组与治疗组之间的瘤大小及瘤重存在差异，差异有统计学意义（Plt;0.05）。 结论：rhuCD40L对人结肠癌有一定的治疗作用。 【关键词】CD40；CD40配体；人工合成三聚体CD40L；裸小鼠；结肠癌 CD40L对表达CD40的肿瘤细胞具有广泛的生长调节作用。大量研究表明，CD40L与表达CD40的肿瘤的相互作用可以直接抑制多种肿瘤的生长。结肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，在我国近20年来尤其在大城市，发病率和病死率有逐年上升的趋势。目前治疗结肠癌仍以手术切除为首选治疗方法，但由于术后局部复发和转移率较高，术后5年生存率仍较低。当前需要寻求一种更好的辅助治疗手段以提高结肠癌患者生存率。因此，本实验以裸鼠为载体，选用人结肠癌HT-29细胞株建立人结肠癌裸鼠皮下移植模型，旨在研究rhuCD40L的抗肿瘤作用。 1 材料与方法 1.1细胞: HT-29人结肠癌细胞株，由中国科学院上海细胞库提供。 1.2实验动物: 20只SPF级裸小鼠，4～5周龄，体重16～20克，均为雌性，由中国科学院上海实验动物中心提供。均饲养于苏州大学SPF级实验动物中心。 1.3主要试剂和药物: McCoy5A培养基购自GiBco公司；rhuCD40L购自Cayman Chemical公司。 1.4细胞培养与传代: 以下各项操作均在无菌细胞培养室的超净工作台中进行。人结肠癌HT-29细胞于McCoy5A培养基（含10%新生牛血清）中维持，置于37、5%CO2孵箱内培养，细胞为单层贴壁生长，待贴壁细胞融合达70%～80%时以胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化传代。 1.5收集细胞并接种裸小鼠: 将处于对数生长期的细胞以胰酶消化后用无血清McCoy5A培养液稀释成细胞悬液，离心、弃去上清，再以无血清McCoy5A培养反复洗涤、离心3次，弃上清，以无血清McCoy5A培养液稀释细胞并调整细胞浓度至3×107/ ml；取该细胞悬液0.1 ml/只均注射于裸鼠右上肢根部的背部皮下。 1.6分组治疗: 待肉眼可见裸鼠接种部位有肿瘤长出后，将20只裸鼠随机分成二组，每组10只。A组（对照组）：以生理盐水0.5ul/g/日作肿瘤周围皮下注射，1次/日，3日为一疗程，每周一疗程，共5周；B组（治疗组）：以rhuCD40L0.5ug/g/日作肿瘤周围皮下注射，1次/日，3日为一疗程，每周一疗程，连续治疗5周。 1.7分别于治疗后第1、3、7、14、28、35天用游标卡尺测量每个肿瘤大小，并重复测量三次，取平均数，以下述公式计算肿瘤体积：V=ab2π/6 a：肿瘤结节的最大直径 b：肿瘤结节的横经，末次测量后脱颈处死裸鼠，切除肿瘤称重。治疗期间还要连续观察裸鼠的饮食、大小便、精神、活动与消瘦等情况。 1.8 统计学方法: 所有数据以 ±s 表示,用SPSS 15.1统计软件包进行统计学分析，检验水准为0.05。 2结果 2.1 本实验用20只裸鼠均于HT-29人结肠癌细胞皮下接种后4～5d在接种部位出现直径约0.4 cm大小的肿瘤结节，成瘤率为100%。所有裸鼠治疗期间均未出现明显的活动减少、食欲减退、恶心、呕吐、反映迟缓、精神萎靡、消瘦等现象。实验结束时无一裸鼠自然死亡。实验中的裸鼠图片见图1。 2.2 治疗过程中肿瘤生长趋势图见图1（根据治疗过程中所测得的肿瘤体积数据 2.3 治疗结束后测量肿瘤体积值见表1。 分组动物数（n）瘤体积（㎝3）A组102.028±0.047B组100.767±0.007t=77.18, plt;0.05 2.4 治疗结束后各组肿瘤重量比较见表2。 分组动物数（n）瘤重（g）A组101.992±0.224B组100.982±0.410t=68.412, plt;0.05 3 讨论 CD40是肿瘤坏死因子受体( tumor necrosis factor receptor，TNF． R ) 家族的成员， 表达在B淋巴细胞、单核细胞、造血干细胞、树突状细胞(DCs)、内皮细胞、上皮细胞等表面。CD40配体(CD40ligand，CD40L)也称CD154，是肿瘤坏死因子(TNF)家族的成员，主要由活