SIM对人骨形态发生蛋白-2you导大鼠异位成骨的X射线学研究.docVIP

　　SIM对人骨形态发生蛋白-2诱导大鼠异位成骨的X射线学研究 【摘要】 目的 在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导异位成骨过程中，局部应用不同浓度的辛伐他汀(SIM)，探讨SIM对rhBMP-2诱导成骨的作用。方法 以牛松质骨为原料经过脱脂、脱蛋白等步骤制备牛骨基质明胶载体,将辛伐他汀和rhBMP-2分别与BMG载体复合;将45只雄性SD大鼠随机分为3组。A组：高剂量实验组；B组：低剂量实验组；C组：对照组;将复合体植入大鼠股后部肌袋中，术后15 d、30 d、60 d对实验大鼠进行大体观察、X线检测。结果 大体观察：各组组织块均随着时间延长而变硬，范围变大;X线结果，各组植入部位术后15 d、30 d未见显影，于术后60 d各组可见不同密度的影像，B组和C组钙化明显，成高密度影像；A组成低密度影像。成骨区灰度值A组明显低于B组和C组。结论 高浓度辛伐他汀可明显抑制rhBMP-2的促进成骨作用；低浓度辛伐他汀的抑制作用则不明显；证实了rhBMP-2在促进成骨方面有重要作用。 　　【关键词】 辛伐他汀；重组人骨形态发生蛋白-2；诱导；成骨；X射线放射学 　　 　　骨缺损的修复一直是临床的棘手问题。1995年Crane［1］系统提出了骨组织工程的概念、引起了广大学者的关注。近几年来，利用骨组织工程的方法构建新生骨组织修复骨缺损成为研究工作的热点，本实验采用SD大鼠股部肌袋模型，以牛BMG为载体，旨在局部应用rhBMP-2促进成骨的基础上，联合应用不同浓度的辛伐他汀，来观察二者之间的异位诱导成骨效应，从而为探索辛伐他汀在成骨方面的作用提供实验依据（促进、抑制或无作用），是否能作为rhBMP-2在促进成骨方面具有协同作用的激活物，亦为进一步探索rhBMP-2在促进成骨方面的机制奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及试剂 雄性SD大鼠45只，体重180~200 g，动物由辽宁医学院实验动物中心提供。SD大鼠骨髓间充质干细胞，骨基质明胶，系在辽宁医学院完成。rhBMP-2(广州达晖生物技术有限公司)、辛伐他汀（浙江江北药业有限公司）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 牛BMG载体的制备 取牛股骨下端松植骨去除骨髓、软组织和关节软骨，用大量蒸馏水清洗,参照Urist［2］的BMG 制备方法制备牛松质骨BMG。冻干消毒保存备用。 　　1.2.2 新伐他汀及rhBMP-2与BMG载体的复合 将辛伐他汀用100%酒精配置成15%、2.5%的溶液，将载体浸入上述的含一定量辛伐他汀的酒精溶液中，使药物均匀充分吸附到载体上，热风蒸发酒精，再在室温下自然挥发72 h，环氧乙烷消毒2 h备用。按照实验要求，将rhBMP-2用三蒸水溶解后，采用定量真空抽吸法获得复合材料：含15%辛伐他汀+rhBMP-2 0.25 mg+BMG,含2.5%辛伐他汀+rhBMP-2 0.25 mg+BMG，含rhBMP-2 0.25 mg +BMG 3种复合物,各取15块,冻干后环氧乙烷消毒备用。 　　1.2.3 动物实验 将45只雄性SD大鼠随机分成3组（每组15只），A组：高剂量实验组（含15％辛伐他汀+rhBMP-2 0.25 mg）；B组：低剂量实验组（含2.5%辛伐他汀+rhBMP-2 0.25 mg）；C组：阳性对照组（含rhBMP-2 0.25 mg）。水合氯醛麻醉后,每只大鼠右侧股部去毛。常规消毒后暴露后股部肌袋。A、B、C组动物分别植入相应载体。仔细缝合肌肉、皮肤,麻醉清醒后送回笼养。于术后15d、30d、60d处死动物，每组每期5只进行实验检测。 　　1.3 实验结果检测 　　1.3.1 大体观察 对术后第15、30、60天的SD大鼠进行组织块硬度、范围及肢体运动情况的观察。 　　1.3.2 X线观察术后第15、30、60天，处死SD大鼠后立即采用Specimen Radiography System(Faxitron X-ray Corporation)进行摄片，投照条件为球管电压30kV，曝光时间3s，电流强度自动，并采用ACR2000i系统合成数码X线图像，应用CAIS-1000图像分析软件对成骨区域灰度值进行测量。 　　1.4 统计学处理 实验所得数据以均数±标准差（x±s）表示。采用SPSS 13.0软件进行多样本均数的方差分析。Pgt;0.05认为差异有显著性。2 结果 　　2.1 大体观察 术后3组SD大鼠均有死亡，其中A组无死亡，B组死亡2只（术后2d及6d各一只），C组死亡5只（术后第2天二只，第3天一只，第5天一只，第20天一只），均按照相应实验条件予以补充。术后第15天，各组于股后部植入处均可扪及新生硬组织；术后第30天，B组、C组新生硬组织范围变大，硬度增加，A组则无明显变化；第60天，B组、C组