Survivin反义核酸you导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实.docVIP

　　Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实 作者：马荣，陈曦海，唐丽萍，耿晓星，张云艳，张英蕾，王晶 【关键词】 Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因 　　Experimental study on apoptosis of ovarian cancer cells and reversal docetaxel drug resistance induced by Survivin antisense RNA 　　【Abstract】 AIM: To establish Survivin antisense RNA and explore its effect on the apoptosis of ovarian cancer cells and the sensitivity to docetaxel and its mechanism of reversing docetaxel drug resistance. METHODS: Survivin antisense eukaryotic vector (antipcDNA3svv) ent etry; sensitivity to docetaxel ined by MTT; expression of MDR1 mRNA pared inal apoptotic change etry and the apoptosis rate ental group to docetaxel L and control group L, so the statistical difference RNA of Skov3SVVanti group pared RNA. 　　【Keys; apoptosis; docetaxel; MDR1 　　【摘要】 目的: 构建Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv），探讨其对卵巢癌的凋亡诱导作用、对多西他赛的化疗增敏作用及逆转耐药的机制. 方法：采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染卵巢癌细胞系Skov3, 筛选出阳性细胞株. 以TT法检测其对多西他赛的化疗增敏作用，并检测实验组细胞（Skov3SVVanti）MDR1 mRNA的表达. 结果：稳定表达antipcDNA3svv的Skov3SVVanti其Survivin蛋白表达比未转染者明显降低，Skov3SVVanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%，对多西他赛的IC50值为（13.3±2.25）ng/mL,而对照组（Skov3）为(53.2±2.45) ng/mL，差异具有明显的统计学意义(Plt;0.01). Skov3SVVanti组MDR1 mRNA表达较Skov3组明显减少（Plt;0.01）. 结论：Survivin反义核酸可诱导卵巢癌细胞凋亡，并通过降低MDR1 mRNA表达增强多西他赛化疗敏感性. 　　【关键词】 Survivin反义核酸；卵巢肿瘤；凋亡；多西他赛；多药耐药基因 　　0引言 　　上皮性卵巢癌是常见的妇科肿瘤，具有易转移及复发的特性，因此手术后化疗是卵巢癌规范化治疗最重要的内容之一. 多西他赛（docetaxel）又名泰索帝是治疗卵巢癌的新药，其联合铂类治疗卵巢癌临床缓解率远高于铂类联合其他化疗药. 但是对于一些复发和多处转移的患者，多西他赛也产生了耐药现象. Survivin是新近发现的IAP(inhibitor of apoptosis protein)家族成员，能抑制caspase 活性而发挥抗凋亡作用. 已有研究证实［1］，Survivin基因的高表达与化疗耐药有密切关系，抑制Survivin基因的表达能增加肿瘤组织对化疗的敏感性，对于维持正常细胞生物学特性具有重要作用［2］. 本研究旨在研究应用反义策略阻断Survivin表达，对诱导卵巢癌细胞凋亡及提高卵巢癌细胞多西他赛敏感性的作用，并进一步探讨其逆转耐药的机制. 　　1材料和方法 　　1.1细胞株和细胞培养人卵巢癌细胞株Skov3由哈尔滨医科大学肿瘤研究所惠赠. 用含有100 mL/L胎牛血清（Gibco公司）的RPMI 1640（Gibco公司）培养（37℃，50 mL/L CO2）. 顺铂（F.H.Faulding amp; Co Ltd公司）及多西他赛（Aventis Pharma, Dagenham公司）溶解于DMSO(Gibco公司)，4保存. 　　1.2Survivin反义真核表达载体（antipcDNA3svv）的构建Survivin基因通过RTPCR方法克隆获得. 应用Trizol（Takara公司）法从卵巢癌细胞株Skov3中抽提总RNA，正向引物为5′atattctagaccat