Survivin反义核酸影响A肺癌细胞增殖和凋亡的研究.docVIP

　　Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究7300字 编辑。 作者：郑人源　蒲铃玲　刘桦　潘克俭　王玉明 【摘要】 　　目的　 研究 Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的 影响 。 方法 　针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，转染A549细胞，PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量；TT法检测细胞增殖，TUNEL法检测细胞凋亡。结果　Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549细胞中survivin的mRNA和蛋白水平。MTT比色法结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制A549细胞增殖，抑制率远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。TUNEL法检测结果显示，反义寡核苷酸还显著增强A549细胞对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。结论　survivin反义寡核苷酸有望 应用 于肿瘤的辅助 治疗 之中。 【关键词】 Survivin；反义寡核苷酸；A549细胞；增殖；凋亡 Abstract：Objective To investigate the effect of survivin antisense oligonucleotide to the proliferation and apoptosis of A549 cells.Methods Designed a human survivin antisense oligonucleotides and transfected it into A549 cells. The expression of survivin mRNA and the level of protEin ethods respectively.The MTT assay easured by TUNEL assay.Results The quantity of survivin mRNA and the level of protEIn uch higher than the rate of the control.The apoptotic rate obtained by transfecting cells oharringtonine.Conclusion The experiment results indicate that antisense oligonucleotide can deserve as an approach to subservient tumor therapy in future. Key 　　Survivin（存活素）属于凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族，具有强大的抗细胞凋亡功能，通常以二聚体形式存在，与Caspase二聚体以均称对等方式结合，从而抑制后者活性，进而抑制了细胞凋亡［1］；也可活化CDK4（周期蛋白依赖性激酶4），使细胞进入增殖周期，导致大量细胞无限制生长［2］。在正常生理状态下，Survivin不在终末分化的成人组织表达。但在绝大多数癌组织中表达，而且随着癌前细胞向癌细胞的转化，其表达逐渐升高［3，4］。肿瘤是否发生转移与预后密切相关。正常细胞脱离原来的组织时会启动凋亡过程，导致细胞死亡。研究认为，在恶性肿瘤中，脱落的癌细胞因为Survivin对凋亡的抑制而受到了保护，得以继续存活并分裂增殖，进而进行远离部位的转移，形成肿瘤。从而使病人预后不良［5］。因此认为Survivin的存在代表着正常细胞恶性转化的细胞生物学行为特征。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核苷酸，抑制Survivin蛋白的合成，验证了Survivin反义寡核苷酸能抑制A549细胞增殖，提高细胞对抗肿瘤药物高三尖杉酯碱（homoharringtonine,HHT）的敏感性。 1　材料与方法 1.1　试剂和细胞株 A549肺癌细胞株由四川大学生命 科学 院细胞生物学教研室赠送。脂质体LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司；MTT(噻唑蓝)购自Santa Cruz公司；兔抗Survivin多克隆抗体购自Santa Cruz公司；逆转录试剂盒购自MBI公司；Tag聚合酶和TRIZOL试剂购自Gibco公司；PVDF膜购自Millipore公司；ECL试剂盒购于博士德公司；细胞凋亡DNA片段原位末端标记(TUNEL)试剂盒购自Boehringer Mannheim公司。高三尖杉酯碱购于四川大学华西 医院 药房。 1.2　反义寡核苷酸 论文 应用