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药学、生药学专业毕业论文 [精品论文] 毛裂蜂斗菜中蜂斗菜总内酯的制备及生物活性研究 关键词：毛裂蜂斗菜 蜂斗菜总内酯 生物活性 抗炎性水肿 抗肿瘤活性 过敏性鼻炎 摘要：毛裂蜂斗菜(Petasites tricholobus Franch．)是菊科蜂斗菜属植物，广泛分布于西南、西北地区，其根茎民间用于解毒祛瘀，外敷治跌打损伤、骨折蛇伤等，其花蕾在中国西北地区作为款冬花的替代品用于止咳、平喘。 研究背景：蜂斗菜属植物欧蜂斗菜(Petasites hybridus)作为植物药，在欧洲已经有几百年的应用历史。其根茎的二氧化碳提取物用于治疗偏头疼，泌尿生殖道痉挛，哮喘，过敏性鼻炎等。倍半萜类化合物被认为是其主要有效成分，现代药理研究表明，蜂斗菜素(petasin)和硫蜂斗菜素(S-petasin)等倍半萜类化合物具有抗组胺，抑制白三烯合成，降低细胞内钙离子浓度的作用，从而达到抗炎、解痉的药效。倍半萜内酯类化合物，初步的体外药理实验表明，这类化合物有细胞毒性，具有潜在的抗癌活性，并且可抑制血小板活化因子，达到抗凝的作用。为了开发我国蜂斗菜属植物资源，本课题组在前期对其同属植物毛裂蜂斗菜(Petasites tricholobus Franch．)的化学成分进行了较为系统性的研究，从毛裂蜂斗菜根茎中分离得到倍半萜内酯类化合物蜂斗菜内酯D、蜂斗菜内酯B以及蜂斗菜内酯Ⅰa(1)，蜂斗菜内酯Ⅱ a(2)，蜂斗菜内酯Ⅲa(3)，蜂斗菜内酯Ⅳa(4)，蜂斗菜内酯Ⅴa(5)5个倍半萜类新化合物，以及考察了蜂斗菜内酯Ⅰa-Ⅴa对缺氧-复氧造成的神经元损伤及氧化性损伤的保护作用，本研究在此基础之上，进一步对其内酯类化学成分进行生物活性研究。 研究目的：通过对毛裂蜂斗菜中总内酯的制备以及生物活性研究，明确其药理活性，并对其药效机理进行深入的探讨，为毛裂蜂斗菜资源的开发利用以及新药的研发奠定基础。 研究内容和方法： 样品的采集：毛裂蜂斗菜采自四川成都。 1．毛裂蜂斗菜中蜂斗菜总内酯的制备以及含量的HPLC测定：将毛裂蜂斗菜用95％乙醇渗漉提取，提取液浓缩至无乙醇味、冷却，上大孔树脂，依次用60％、80％、95％乙醇洗脱，然后将80％乙醇洗脱液减压浓缩至干，可得蜂斗菜总内酯。应用HPLC测定蜂斗菜总内酯B、D、Ⅳa、Ⅲa的含量。 2．蜂斗菜总内酯过敏性鼻炎的药效学研究。首先对豚鼠以卵清白蛋白(OVA)抗原攻击，依次基础致敏、致敏加强和激发三个阶段成功的建立了过敏性鼻炎(AR)的模型，成功率100％，然后给予蜂斗菜总内酯40mg/kg连续7天，初步证实了蜂斗菜总内酯的抗过敏性鼻炎活性。然后对Wistar大鼠同样以卵清白蛋白(OVA)抗原攻击，依次基础致敏、致敏加强和激发三个阶段成功的建立了大鼠过敏性鼻炎的模型，成功率82.7％，并首次用ELISA实验评价了过敏Wistar大鼠血清中总IgE的效价，进一步佐证模型的成功，然后分别给予蜂斗菜总内酯40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg以及氯雷他定0.942mg/kg连续7天，结果表明蜂斗菜总内酯各个剂量和氯雷他定均能不同程度的减轻抗原诱导的大鼠过敏性鼻炎的症状，并通过对大鼠鼻粘膜病理组织学检查来观察浸润的嗜酸性淋巴细胞的数目的变化。 3．蜂斗菜总内酯治疗过敏性鼻炎的机理探讨。用ELISA实验方法测定血清中IL-4以及组胺的含量。 4．蜂斗菜总内酯体内对二甲苯致ICR小鼠耳肿胀的影响。蜂斗菜总内酯40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg对ICR小鼠灌胃连续给药7天，末次给药后45min，右耳涂以50μl二甲苯致炎，15min后将小鼠颈脱臼致死，用内径7mm的打孔器打下相同部位左右耳片，称重，以两耳片重量之差作为肿胀度。以此为标准来观察蜂斗菜总内酯的抑制炎性水肿的作用。 5．蜂斗菜总内酯体内外抗肿瘤活性研究。依次用蜂斗菜总内酯160、80、40、20、10、5、2.5、1.25ug/ml对HePG2、MCF-7、A549、Hela肿瘤细胞体外MTT实验以及ICR小鼠体内S180肿瘤实验，在接种第二天分别给予蜂斗菜总内脂160mg/kg、80mg/kg、40mg/kg连续给药14天，第16天眼眶取血、脱颈处死剥离肿瘤、并取脾脏和胸腺称重记录。 结果和结论：蜂斗菜总内酯减少过敏性大鼠搔鼻、喷嚏次数以及减轻鼻涕症状，并能有效减少鼻粘膜中嗜酸性淋巴细胞数目，ELISA实验结果表明它还能显著降低血清中IL-4和Histamine含量，故而推断毛裂蜂斗菜总内酯抗过敏性鼻炎的机制是通过抑制IL-4使特异性抗体IgE降低，阻断AR症状的主要炎性介质组胺作用于H1受体的过程，具有与H1受体拮抗剂相似的药理作用，从而达到缓解鼻炎症状的目的；蜂斗菜总内酯能