仪器分析四版高效液相色谱.pptVIP

（1）缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 3、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC） 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 （2）电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 第73页/共78页 （5）色谱与电泳分离模式的结合。 （3）中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； （4）可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； 第74页/共78页 　　加电渗流改性剂使电渗流反向，用于淌度很大的离子的分离，主要是无机阴离子的分离。负高压 。 加阳离子表面活性剂，如十六烷基三甲基溴化铵 电渗流 Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ Θ X－ X－ X－ X－ X－ （－） 高压 （＋） 地 4、 毛细管离子分析 第75页/共78页 三、　高效毛细管电泳仪器 清洗 记录 检测器 高压电源 毛细管 电解液 第76页/共78页 1、高压电源：产生0~30kV 稳定连续可调电压 2、进样系统 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； 进样端加压、出口端抽真空、虹吸进样 4、检测系统 商品仪器：UV-VIS；荧光 实验室：质谱，电分析 5、清洗系统 一般用负压法，NaOH洗液，减少吸附 3、毛细管柱：毛细管分离柱不涂敷任何固定液 第77页/共78页 四、　应用及前景 特点： A、分离效率高：?104理论塔板数，接近GC 空心管，无固定液，H = B/u；流型不同 B、 分离速度快：优于LC，接近GC C、进样量少：nL 应用： 药物分析：旋光异构体 生化分析：氨基酸衍生物、蛋白、DNA 弱点： 检测器绝对灵敏度高，但浓度灵敏度仅为10-6 第78页/共78页 * 死时间(tM):完全不保留组分流出系统的时间 保留时间(tR):物质从进样开始到检测到信号所需时间 调整保留时间(t’R): 死体积(VM): 保留体积(VR): 调整保留体积(V’R): 四、描述HPLC色谱相关概念 基线，峰，峰高，峰宽，峰面积 第41页/共78页 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 第42页/共78页 * R: 分离度 tR: 保留时间 t0：死时间 W：峰底宽度 五. 色谱分离基本方程 （一）分离度（R） 反映的是相邻两个峰的分开程度 第43页/共78页 * 不同R值时 峰重叠情况示意图 R1.5可以得到基线分离 R太小，两个峰无法彻底分离 R太大，分离时间过长，工作效率低下 一般要求R1.5，也可遵循行业特殊规定 第44页/共78页 * 其中： n:理论塔板 α：分离选择性因子， K:分配系数 根据该公式优化试验条件，提高分离度R。 从数学推导来看，分别增大n，α，k值，都可以提高分离度。 （二）色谱分离基本方程 第45页/共78页 1、选择因子 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值，此时可用符号?表示，即 ? = tr ?(i) / tr ? (s) 式中tr ?(i)为后出峰的调整保留时间，所以?总是大于1的。 相对保留值往往可作为衡量固定相选择性的指标，又称选择因子。 第46页/共78页 * 分离选择性（α）对分离度（R）的影响 如果t0=1min α=1.64/1.58=1.04 α =1.15/0.85=1.35 α =0.95/0.63=1.50 改变分离选择性α的方法 改用不同的流动相 改变流动相的组成 α并非必须大于1.5！ 改变流动相pH值 尽量优化前几种实验条件提高a值， 改变柱温 避免改变固定相（买新柱子），以便降低成本 应用特殊的化学效应 改变固定相 第47页/共78页 2、分配系数K 指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即 K=溶质在固定相中的浓度 / 溶质在流动相中的浓度 = Cs / Cm 分配系数是由组分和固定相的热力学性质决定的，它是每一个溶质的特征值，它仅与三个变量有关：固定相、流动相和温度。与两相