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大鼠降钙素基因转录体在甲状腺及脑中的不同剪接作用 第63页/共75页 ? RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工(differential RNA processing)。 （三）. mRNA的编辑(mRNA editing) 人类apo B基因 mRNA（14500个核苷酸） 肝脏 apo B100 （分子量为511 000） 肠道细胞 apo B48 （分子量为240 000） mRNA编辑 第64页/共75页 apo B mRNA 的编辑加工 第65页/共75页 二、tRNA的转录后加工 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA 第66页/共75页 RNAaseP、内切酶 第67页/共75页 tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP 第68页/共75页 碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? mA （1）甲基化 （1） （1） （3） （2） （4） 第69页/共75页 三、rRNA的转录后加工 转录 45S - rRNA 剪接 18S - rRNA 5.8S和28S-rRNA rDNA 内含子 内含子 28S 5.8S 18S 第70页/共75页 四、核 酶 具有酶促活性的RNA称为核酶。 核酶(ribozyme) 第71页/共75页 四膜虫rRNA内含子的二级结构 四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接方式 5′-端核苷酸序列 第72页/共75页 最简单的核酶二级结构——槌头状结构 (hammerhead structure) 通常为60个核苷酸左右 同一分子上包括有催化部份和底物部份 催化部份和底物部份组成锤头结构 除rRNA外，tRNA、mRNA的加工也可采用自我剪接方式。 第73页/共75页 核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 第74页/共75页 人工设计的核酶 粗线表示合成的核酸分子 细线表示天然的核酸分子 X 表示一致性序列 箭头表示切断点 第75页/共75页 茎环结构使转录终止的机理 使RNA聚合酶变构，转录停顿； 使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。 5′pppG 5? 3? 3?5? RNA-pol 第31页/共75页 二、真核生物的转录过程 （一）转录起始 真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。 第32页/共75页 转录起始点 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子 顺式作用元件(cis-acting element) 1. 转录起始前的上游区段 AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体 第33页/共75页 顺式作用元件（cis-acting element）： 1. 可影响自身基因表达活性的DNA序列 2. 位于基因的旁侧，可以调控影响基因表达的DNA序列。包括启动子（promoter） 、增强子（enhancer）、应答元件（responsive elements）等。其活性只影响与其自身同处于一个DNA分子上的基因。其本身并不编码蛋白质，可以与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。 第34页/共75页 2. 转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。 第35页/共75页 参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ 第36页/共75页 3. 转录起始前复合物 (pre-initiation complex, PIC) 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 第37页/共75页 POL-Ⅱ TFⅡF ⅡA ⅡB 由RNA-Pol Ⅱ催化转录的PIC POL-Ⅱ TFⅡF ⅡH ⅡE TBP TAF TFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物 TATA ⅡA ⅡB TBP TAF TATA ⅡH ⅡE CTD- P PIC组装完成，TFⅡH使CTD（carboxyl terminal domain)磷酸化 第38页/共75页 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。 转录延