o审审glcnac修饰对视网膜微血管内皮细胞增殖迁移的影响-o examine the effect of gl cnac modification on proliferation and migration of retinal microvascular endothelial cells.docxVIP

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2018-06-01 发布于上海
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o审审glcnac修饰对视网膜微血管内皮细胞增殖迁移的影响-o examine the effect of gl cnac modification on proliferation and migration of retinal microvascular endothelial cells

中英文对照表Diabeticretionopathy，DR糖尿病视网膜病变O-glycoside-linkedN-acetylglucosaminemodificationO-GlcNAcmodificationO-GlcNAc修饰O-GlcNActransferase，OGTO-GlcNAc转移酶O-GlcNAcase，OGAO-GlcNAc水解酶glutamine:fructose6-phosphateaminotransferase,，GFAT谷氨酰胺：6-磷酸果糖酰基转移酶UDP-GlcNAc二磷酸尿嘧啶-N-乙酰葡萄糖胺CellCountingKit-8CCK-8试剂盒Fetalbovineserum，FBS胎牛血清WesternBlot，WB免疫印迹Bovineserumalbumin，BSA小牛血清白蛋白Fibronectin，FN纤维连接蛋白sodiumdodeyclsulfatePolyacrylamidegeleleetrophoresis，SDSSDS聚丙烯酞胺凝胶电泳Opticaldensity，OD吸光度值O-GlcNAc修饰对视网膜微血管内皮细胞增殖迁移的影响华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科研究生李霞导师程扬副教授中文摘要目的本文利用体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)研究O-GlcNAc修饰对猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖和迁移的影响，探索O-GlcNAc修饰在糖尿病视网膜病变病理改变中的作用。方法分别用高糖培养基及50μMPUGNAC处理猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞），利用WesternBlot技术检测RF/6A细胞内总蛋白的O-GlcNAc修饰水平，用CCK-8检测RF/6A细胞的增殖能力，用Tanswell小室检测RF/6A细胞的迁移能力。结果①高糖组RF/6A细胞内总蛋白的O-GlcNAc修饰水平明显高于正常组和高渗组，差异有统计学意义（P0.05），正常组与高渗组差异无统计学意义（P0.05）②与正常组和高渗组相比，高糖环境下细胞的迁移增加，差异有统计学意义（P0.05），而细胞增殖的差异无统计学意义(P0.05)，正常组与高渗组相比，细胞的增殖迁移能力差异均无统计学意义（P0.05）。③通过OGA特异性抑制剂PUGNAC（50μM）处理后细胞内O-GlcNAc修饰水平升高。④正常糖环境下培养的RF/6A细胞用PUGNAC处理后迁移能力降低，与PUGNAC未处理组相比差异有统计学意义(P0.05)，而对细胞的增殖的影响差异无统计学意义(P0.05)。高糖环境下培养的RF/6A细胞用PUGNAC处理后迁移能力也显著降低，差异有统计学意义（P0.05)。结论O-GlcNAc修饰水平可能影响视网膜微血管内皮细胞的迁移，异常升高的O-GlcNAc修饰可能对糖尿病视网膜病变的发展有延缓作用。关键词糖尿病视网膜病变、O-GlcNAc修饰、RF/6A细胞、血管新生、增殖、迁移EffectsofelevatedexpressionofO-GlcNAc–modifiedproteinsontheproliferationandmigrationofretinalcapillaryendothelialcellsDepartmentofophthalmology,UnionHospitalAffliatedtoTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyMasterdegreecandidate:LiXiaSupervisor:Prof.ChengYangAbstractObjectiveThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectofelevatedexpressionofO-GlcNAc–modifiedproteinsontheproliferationandmigrationofretinalcapillaryendothelialcells,anddeterminetheroleofO-glycoside–linkedN-acety-lglucosamine(O-GlcNAc)modificationofproteinsinthepathogenesisofdiabeticretinopathyusingRF/6Acellsculturedinvitro.MethodsRF/6AcellsculturedinvitroweredividedintoNGgroup,HOgroup,HGgroup.ThenRF/6Acellsculturedinnormalglucosemediumweretreatedwith50μMPUGNAC,an