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pdx1联合多种细胞因子调控微环境诱导人胎盘 mscs 向胰岛β样细胞分化的研究-study on pdx - 1 combined with various cytokines to regulate microenvironment to induce differentiation of human placental mscs into islet β - like cells.docx

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pdx1联合多种细胞因子调控微环境诱导人胎盘 mscs 向胰岛β样细胞分化的研究-study on pdx - 1 combined with various cytokines to regulate microenvironment to induce differentiation of human placental mscs into islet β - like cells

协和医院的图标独创性声明本人郑重声明,本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□,在年解密后适用本授权书。不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日目录前言1摘要4Abstract71第一部分人胎盘间充质干细胞的分离、培养、扩增及鉴定1.1前言111.2材料与方法121.3实验结果221.4讨论231.5参考文献252第二部分PDX1联合多种生长分化因子诱导人胎盘MSCs向胰岛β样细胞分化的体外研究2.1前言332.2材料与方法342.3实验结果432.4讨论452.5参考文献483第三部分PDX1联合多种生长分化因子诱导人胎盘MSCs向胰岛β样细胞分化的体内研究3.1前言583.2材料与方法593.3实验结果623.4讨论653.5参考文献684综述744.1参考文献80附录1(英文缩略词表)86附录2(攻读博士学位期间发表论文目录)88致谢90前沿糖尿病的发病率每年都呈上升趋势,中国是全球第二大糖尿病国家。随着我们对糖尿病的认识越来越深刻,糖尿病的治疗方法也越来越多,如胰岛素注射治疗、口服降糖药全胰腺移植及胰岛移植等。糖尿病的慢性并发症仍然是糖尿病无法避免的难题,无法从根本上解决糖尿病患者对胰岛的素依赖性。大部分糖尿病患者都需要应用胰岛素注射治疗来控制血糖,这不但遭受长期胰岛素注射所带来的不便和痛苦同时又不能稳定的控制体内血糖水平并避免并发症的发生[1]。因此如何让糖尿病达到进一步的有效治疗,受到了所有医学研究者的广泛关注。近年来全胰腺移植和1型糖尿病的胰岛肝内移植为治愈糖尿病带来了希望,但是供体的不足、术后的免疫排斥反应和费用较贵等都极大的限制了其广泛应用[2]。干细胞治疗是随着分子免疫学、分子生物学、细胞生物学及组织工程学等学科的发展而逐渐发展起来的一种新方法[3]。它能够从细胞和基因水平治疗糖尿病,达到临床上治愈且不良反应少,血糖可以维持平稳和预后好等诸多优点,故越来越引起医学研究者的重视[4]。胰十二指肠同源框基因1(pancreaticandduodenalhomeoboxfactor1,Pdx1)是胰腺发生与发育相关最关键的转录因子之一,在胚胎发育过程中它能促进胰腺的早期发育和晚期胰岛素分泌细胞分化,在成体中能帮助维持胰岛β细胞的形态和功能[5];参与调控胰岛细胞特异性表达的多种基因及调控下游基因的表达[6],其中主要的有葡萄糖激酶(GK),胰岛素(insulin),胰高血糖素(glucagon),神经元素3(Neurogenin3,NGN3),葡萄糖转运体-2(glucosetransporter-2,Glut2)等[7],而这些基因都参与胰腺β细胞的分化成熟。国外大量研究证实,PDX1表达缺失的鼠胰腺组织发育不完全而出现严重的糖尿病[8-9],这提示PDX1基因在胰腺发育过程中及维持β细胞正常生理功能等方面扮演着极为重要角色。因为干细胞是相对静止的一类细胞,故其利用脂质体感染效率很低[10]。因为质粒、腺病毒、逆转录病毒载体是研究疾病基因治疗最常用的载体,与其他载体相比腺病毒载体系统具有载体制备较容易、病毒基因不与宿主细胞基因组整合、对人致病性较低、无致突变性、对增殖期细胞和静止期细胞都能感染、感染效率高、安全性好等诸多优点,故是公认的感染PDX1最合适的载体[11-12]。外源基因PDX1感染MSCs在体外能够诱导分化为胰岛素分泌细胞,但胰岛素分泌水平低下[13];也有报道,改变MSCs生存的微环境,用多种细胞因子联合诱导,诱导后的细胞胰岛素分泌水平也很低[14-15]。因此,我们构建了腺病毒载体pAdxsi-GFP-PDX1,并转染入人胎盘MSCs中,试图利用基因转移技术联合微环境改变的方案诱导,拟提高诱导效率,提高胰岛素的分泌量,在体内外研究转染腺病毒载体pAdxsi-GFP-PDX1后的人胎盘MSCs向胰岛β样细胞分化,以期能满足临床治疗的需要。参考文献:1、BorlonganCV,GloverLE,TajiriN,KanekoY,FreemanTB.Thegreatmigrationof

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