rassf6和mir75p在人乳腺癌中的作用和机制-role and mechanism of rassf 6 and mir 75 p in human breast cancer.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写Bp英文全称Base pair中文全称碱基对BrCaBreast cancer乳腺癌cDNAComplementary deoxynucleic acid互补脱氧核糖核酸DEPCDiethyl pyrocarbonate焦炭酸二乙酯DNADeoxynuleic acid脱氧核糖核酸dNTPDeoxynucleoside triphosphate mix脱氧核苷三磷酸混合物EDTAEthylene diaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸EREstrogen receptor雌激素受体FBSFetal boving serum胎牛血清FCMFlow cytometry流式细胞术HDACIsHistone deacetylases inhibitors组蛋白去乙酰化酶抑制剂HEHematoxylin and Eosin苏木精-伊红染色HER2IHCHuman epidermal growth factor 2Immunohistochemistry表皮生长因子受体 2免疫组织化学KbKilobase千碱基对RTReverse transcription逆转录MMethylation甲基化mRNAMessenger ribonucleic acid信使核糖核酸MSPODMethylation specific PCROptical density甲基化特异 PCR光密度值PBSPhosphate buffered saline磷酸盐缓冲液PCRPolymerase chain reaction聚合酶链反应PRProgestogen receptor孕激素受体rpmRevolusion per minute每分钟转速SDSSodium dodecylsulfate十二氨基磺酸钠1TEMEDN,N,N`,N`-TetramethylethylenediamineN,N,N`,N`-四甲基二乙胺TrisTris(hydroxymethyl)-aminomethane三羟甲基氨基甲烷TSGTumor suppressor gene肿瘤抑制基因UUnmethylation非甲基化5-Aza-dC(A)5-aza-2`-deoxycytidine5-氮杂-2-脱氧胞苷TSA(T)WBTrichostatin AWestern blot曲古菌素 A免疫印迹试验AOAcridine orange吖啶橙EBEthidium bromide溴化乙锭IHCImmunohistochemistry免疫组织化学2RASSF6 和 miR-7-5p 在人乳腺癌中的作用和机制摘要第一部分 RASSF6 在人乳腺癌中的甲基化检测及功能 机制研究目的：检测 RAS 相关结构域家族成员 6(Ras association (RalGDS/AF-6) domain family member 6, RASSF6) 在人乳腺癌细胞株中及乳腺癌组 织中的表达情况；2检测 RASSF6 启动子 CpG 岛在人乳腺癌细胞株和人乳腺癌组织中甲 基化情况；3验证 RASSF6 对人乳腺癌细胞增殖，细胞周期，细胞凋亡，细胞迁 移侵袭方面的调控作用；4探讨介导 RASSF6 抑癌作用相关的信号通路改变。方法：1采用 RT-PCR 检测 RASSF6 在人正常组织、人乳腺癌细胞株和人正 常乳腺组织中的表达情况；采用 Western blot 检测 RASSF6 在人乳 腺癌细胞株中的表达情况；采用 Real-time PCR 检测 RASSF6 在人 乳腺癌组织和癌旁组织中的表达情况；分析 Oncomine 微阵列芯片 数据库中，RASSF6 在人乳腺癌正常组织及癌组织中的表达情况。使用甲基化特异性 PCR（Methylation-specific PCR，MSP）检测3RASSF6 在人乳腺癌细胞株和人乳腺癌组织中的启动子甲基化情况；使用 BGS 检测#115 号乳腺癌样本中 RASSF6 启动子甲基化情 况。3体外实验中，使用平板克隆实验，软琼脂克隆实验，CCK-8 实验，EdU 掺入实验检测 RASSF6 对人乳腺癌细胞增殖能力的调控作用。4体内实验中，使用裸鼠成瘤实验验证 RASSF6 对人乳腺癌细胞增殖 能力的调控作用。5采用流式细胞仪检测 RASSF6 对人乳腺癌细胞的细胞周期的调控作 用，并采用 Western blot 检测 RASSF6 对 p21 和 p27 的调控作用。6采用 AO/EB 染色和流式细胞仪检测 RASSF6 对人乳腺癌细胞凋亡 的 诱 导 作 用 ， 并 用 Western blot 检 测 cleaved-caspase3 ， cleaved-caspase7，cleaved-caspase9，cle