rcan1.4通过抑制cannfat信号通路阻遏肝癌转移的分子机制-rcan 1.4 inhibits the molecular mechanism of liver cancer metastasis by inhibiting cann fat signaling pathway.docx

上海交通大学博士学位论文 上海交通大学博士学位论文 PAGE PAGE VI 摘要 肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC；以下简称肝癌）是全球发病率排 第五的肿瘤，由于其高转移复发率，HCC 患者的预后往往很差。遗传或表观遗 传改变导致的癌基因活化和抑癌基因失活是 HCC 发生的关键因素。以往的研究 表明，肿瘤相关基因如抑癌基因 p53、RB 和癌基因 CTNNB1 等的改变与 HCC 的复发转移有关。然而，近年来的基因表达谱芯片和外显子测序芯片结果显示， 在 HCC 的发生发展过程中还有大量肿瘤相关基因和通路发生了改变。 Calcineurin（CaN）內源性调控分子 RCAN1（regulator of calcineurin 1）在 唐氏综合症、阿尔茨海默氏症及心脏肥大等病理过程中发挥重要作用。近期， RCAN1 被发现还参与内皮细胞响应 VEGF 介导的血管生成信号。至今，关于 RCAN1 在 HCC 中的作用还未有研究报道。本课题组前期的研究工作对 14 例肝 癌病人的癌组织及配对癌旁组织做了 Affimatrix 表达谱芯片，分析结果显示 RCAN1 在肝癌组织显著表达下调。基于此结果，在本文的第一部分研究中，我 们首先对肝癌组织及配对癌旁组织检测了 RCAN1 三种选择剪接体的表达变化， 发现剪接体 RCAN1.4 在肝癌组织中表达显著下调。通过对肝癌组织芯片（n=196） 做免疫组化检测，分析发现 RCAN1 的低表达与肝癌患者的预后不良显著相关。 在体外功能实验中，发现过表达 RCAN1.4 可抑制肝癌细胞的增殖、运动和侵袭 能力，而干扰 RCAN1.4 则促进肝癌细胞的增殖、运动和侵袭。在进一步的体内 实验中，证实了 RCAN1.4 具有抑制肝癌转移的功能。接着，采用特异性 siRNA 进行干扰实验，发现 RCAN1.4 通过调控 CaN/NFAT1 通路参与 HCC 的运动和侵 袭过程。在深入的机制研究中发现，RCAN1.4 可能通过调节 IGF-1 的自分泌影 响 IGF-IR/ERK/MAPK/MMP-9 信号通路；同时，RCAN1.4 还可能通过调节 VEGF 的旁分泌影响 HUVEC 的迁移过程；此外，肝癌临床样本中 RCAN1 的表达分别 与 NFAT1、IGF-1 和 MVD 具有负相关性。在临床预后分析中发现，联合 RCAN1 和 IGF-1 具有更高的肝癌预后评估价值。以上结果有望为抗肿瘤和抗血管生成治 疗肝癌转移提供潜在靶点。 Clusterin（CLU）是一种压力诱导的分子伴侣，而 kynurenine 3-monooxygenase （KMO）是色氨酸犬尿氨酸代谢途径中的一种关键酶。在本文的第二部分研究 中，我们研究了 CLU 和 KMO 在肝癌中的功能和预后价值。在针对 CLU 的研究 中，发现 CLU 在肝癌中的高表达与肝癌患者的低生存率和高复发率相关。体内 和体外实验发现干扰 CLU 可抑制肝癌的侵袭转移，而过表达 CLU 则促进肝癌的 侵袭转移。在体内转移模型中，发现 CLU 分子靶向药物 OGX-011 同样可以抑制 肝癌的转移。这些结果表明 CLU 分子靶向药物 OGX-011 有望成为治疗肝癌转移 的新药。在针对 KMO 的研究中，发现 KMO 在肝癌中显著表达上调且与肝癌患 者的低生存率和高复发率相关。体外功能实验显示，KMO 可以影响肝癌细胞的 增殖、运动和侵袭。这些结果提示，KMO 起到促进肝癌进展的作用并有望成为 新的肝癌预后指标。 综上所述，本文发现 RCAN1.4 在肝癌中起抑癌作用，而 CLU 和 KMO 起促 癌作用。本文不仅通过体内体外实验证实了它们在肝癌发展中的抑癌或促癌功 能，还通过临床组织芯片分析评估了 RCAN1、CLU 和 KMO 在肝癌中的预后价 值。我们的这些研究将为肝癌治疗提供实验依据。 关键词：肝细胞癌，抑癌基因，转移，RCAN1.4，CLU，KMO VII VII Abstract Hepatocellular carcinoma (HCC) is the fifth most frequent cancer worldwide. Due to its high rates of recurrence and metastasis, prognosis is still disappointing for HCC patients. Activation of oncogenes and inactivation of tumor suppressor genes in genetic and epigenetic mechanisms are critical factors for HC