pygo2mirna在人脑胶质瘤的表达及作用机制研究-expression and mechanism of py go2 mirna in human glioma.docxVIP

目录缩略语表 1中文摘要 2英文摘要 3前言 5第一部分Pygo2-miRNAs 的预测、筛选71. 材料 71.1 实验材料 71.2 主要仪器 71.3 主要试剂 71.4 常用溶液及培养基配制 82. 实验方法 83. 结果 10第二部分Pygo2-miRNAs 确切作用靶点的确定1. 材料 131.1 实验材料131.2 主要仪器 131.3 常用溶液的配制 132. 实验方法 153. 结果 22第三部分miRNA-214 对脑胶质瘤细胞增殖，侵袭的影响1. 材料 271.1 实验材料 271.2 主要仪器 272. 实验方法 273. 结果 30讨论 32结论 36参考文献 36综述 39缩略语表siRNAsmall interfering RNA小干扰 RNAmiRNAmicroRNA微小 RNAβ-cateninbeta-actinβ-肌动蛋白 3?UTR3?untranslated region3?端非翻译区Bpbase pair碱基对BSAbovine serum albumin牛血清白蛋白cDNAcomplementary DNA互补 DNAEDTAethylenediamine tetraacetic acid乙二胺四乙酸DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚枫ECMextracellular matrix细胞外基质FBSfetal bovine serum胎牛血清HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶PCRpolymerase chain reaction聚合酶链反应RT- qPCRReal time qPCR实时荧光定量 PCRkDkilo-dalton千道尔顿MTT3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3-(4，5-二甲基噻唑-2)- 3，5-di-phenytetrazoliumromide3，5-二苯基四氮唑溴盐NCnegative control阴性对照PBSphosphate-buffered saline磷酸盐缓冲液1Pygo2-miRNA在人脑胶质瘤的表达及作用机制研究摘要 Pygo2蛋白作为Wnt信号通路下游新功能蛋白，其表达紊乱与人脑胶质瘤恶性程度密切相关，调控机制非常复杂，很多机制尚不清楚。本实验旨在探讨人脑胶质瘤中异常表达的miRNA对Pygo2蛋白的可能调控作用。 目的：研究miRNA靶向Pygo2在人脑胶质瘤的表达及作用机制 方法：利用生物信息学预测软件（/vert_50/targetscan，miRanda，http://pictar.mdc-berlin.de/cgi-bin/PicTar_vertebrate.cgiPicTar等）预测Pygo2的miRNAs，进而通过人脑胶质瘤miRNA表达谱芯片检测系统筛选候选的靶向 Pygo2-3UTR的miRNAs。针对差异表达最大的miRNA，首先构建成含有突变位点 Pygo2-3UTR的荧光素酶报告载体，然后利用Pygo2-miRNA过表达质粒下调Pygo2， 从而抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。结果：生物信息学预测软件预测出37个与Pygo2相关的miRNAs，结合人脑胶 质瘤miRNA表达谱芯片低表达结果，发现Pygo2可能受包括miR-31、miR-34c-5p、 miR-195、miR-214在内13个miRNAs调控。荧光素酶报告基因活性、real-time PCR 验证及western blot实验提示，与其余miRNAs相比，miR-214最有可能在人脑胶 质瘤细胞中调控Pygo2的表达。在体外上调miR-214的表达引起胶质瘤细胞增殖、 侵袭力降低。结 论 ： 首 次 发 现 人 脑 胶 质 瘤 中 Pygo2 的 过 表 达 可 能 与 miR-214 相 关 ， miR-214能够通过下调Pygo2基因的表达抑制脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭，提示 miR-214可能作为重要的抑癌因子参与抑制脑胶质瘤增殖、迁移和入侵。这些在 本文验证过的miRNA可能作为生物标记为临床诊断及预后判断提供帮助。关键词：Pygo2, miR-214, 脑胶质瘤, 增殖, 侵袭2Role and mechanism studies on Pygo2-miRNA in human gliomaAbstractThe Pygopus2 (Pygo2) proteins are critical elements in the Wnt signaling pathway, which is exhibited a positive correlation with glioma tumors grade. The mechanisms regulating Pygo2