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静态光散射表征蛋白质-蛋白质相互作用：抑制动力学和解离 中国实验室 生命科学仪器2010第8卷门0月刊 静态光散射表征蛋白质一蛋白质相互作用:抑制动力学和解离 DanSOME,AmyHANLON 摘要通过加入小分子抑制物,时间依赖多角度静态光散射(TD—MALS)u『以用于表征蛋质相与作用抑制动力学而无 需采用标记,同载,底物或其他修饰方法.该方法可以同时测m蛋白质一蛋白质亲和力. 蛋白质结合,解离和聚集动力学速率的量化通 常是理解和最终操纵这些现象的必要因素.尽管目 前多种测量技术已被普遍采用,然而对于一个给定 的系统,采用任何一种检测方法都有可能无法满足 检测要求.标准酶法荧光光谱或辐射检测法需要标 记目标分子,这样可能会在反应速率上引起修饰效 应的问题.选择一个适当的底物也有可能导致测量 混乱.生物物理方法如表面等离子体共振(SPR)需 要将受体固定在表面,同时有可能修改与真实的自 由溶液测量相关的反应.总体而言,这些技术仅仅 只能提供对感兴趣的实际物理现象的间接测量.例 如,荧光与复合物的形成关联性很好,而荧光信号 本身并不能直接用于复合物性质的测量. 1CG—MALS~IEITD—MALS 多角度静态光散射(muhiangle,staticlightscatter— ing,MALS)是一种广泛应用于表征溶液大分子的技 术,它可以测量样品的绝对摩尔质量和尺寸.通常 情况下,MALS检测器与分离技术如尺寸排阻色谱联 用(SEC—MALS)或与场流分离技术联用(FFF—MALS)可 以测定溶液中分子摩尔质量的分布,无需标准参考 物.最近,人们还发展了一种可以自动形成成分梯 度(compositiongradient,CG)的技术,并将其与MALS 联用(CG—MALS),它是通过测量一系列成分的光散 射信号来获得平衡大分子相互作用的定量信息.如 前所述【Il,CG—MALS可以测定均相和非均相体系中可 逆结合蛋白质复合物的平衡结合常数和化学计量学 信息.采用CG—MALS测量时不需要荧光试剂或放射 性标签,额外的底物或崮定化,因而可以测定出任 何溶液中无修饰样品的自由溶液性质.CG—MALS在 药厂中一些更有前景的应用包括抗体/抗原结合,小 分子抑制,脂质体结合蛋白,酶/抑制剂相互作用和 抗体形成.蛋白质分子伴侣,酶/抑制剂相互作用, 蛋白质一表面活性剂或DNA一蛋门质系统等的基础研 究也将得益于这项技术. 静态光散射相比其他方法的本质优势是它可以 直接从测量信号中确定复合物的摩尔质量和组成. 从CG—MALS的数据可以得出复合物形成的化学计量 信息及结合常数. CG—MALS的一个自然延伸是时问依赖(time— dependent,TD)静态光散射,简称为TD—MALS,在这 里溶液的光散射强度是通过一步快速制备送至检测 器,然后通过时问来监测.虽然这些技术并不是很 新,但是利用静态光散射在蛋白质一蛋白质相互作用 动力学方面的应用并不是很多.一些系统通过停流 静态光散射研究包括人血红蛋白在快速pH变化条件 下二聚体～四聚体的平衡口],核糖体的解离和亚基的 结合I,病毒基体蛋白结合主核壳体I,DNA/聚赖氨 酸多聚体形成l5和纤维蛋白酶原的形成『6】.TD—MALS 潜在的应用对象不仅包括基础的分子生物学,还包 括在所确定的缓冲系统内可逆与不可逆治疗性蛋白 质聚集的研究. 2自动化 在TD—MALS方法中,停流测量是在一系列条件 下进行的.TD—MALS的实验流程包括配制一系列的 溶液,并在一个比弛豫时间短的时间范围内将每种 溶液交替输送到MALs和浓度检测器中以获取数据 和确定每种条件的反应速率.实验的总时间范围可 以短至几分钟,也可能长至几个小时.受所需条件 作者简介: Dr.SomeisPrincipalScientist,andMs.HanlonisallRamp;DEngineer,WyattTechnologyCorp.,630oHollisterAve.,SantaBarbara,CA93117, U.S.A.;te1.:805-681-9009;fax:805-681-0123;e-mail:dsomeC~att.COB. 该文已获得InternationalScientificCommunications,Inc再版许可. 26 生命科学仪器2010第8卷门0月刊 中国实验室 的数量以及数据所需采集时间的影响,实验可能会 很繁琐,耗时以及容易出现操作错误.Calyps?系 统(WyattTechnologyCorp.,SantaBarbara,CA)克服了 手;ETD—MALS~J问题,它将样品制备和传输,数据 采集与分析整合成一个综合的软件包,全程实现了 自动化.该系统可以与WyattMALS检测器联