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标准曲线的绘制-吸光度标准曲线绘制 染料吸光度浓度标准工作曲线的绘制实验一 n 染料吸光度—浓度标准工作曲线的绘制 （选做） 一、实验目的 n 掌握分光光度计的使用方法，学会染料 吸收光谱曲线的测定和未知染液浓度的 测定，加深对染色泽和吸收光谱关系的 认识。 二、实验原理 n n n 测定染料在溶液中或 纤维上的含量的方法有多 种，本实验介绍用分光光度计法测定染料在溶 液中的浓度。采用分光光度法测定染料浓度的 基本理论是基于朗白—比耳定理。该定理指 出，有色溶液对一束平行单色光的吸光度与溶 液的浓度和液层厚度之积成正比。 其数学表达式为：A＝KbC C１/A１ = C2/A2 或 C2 = C１/A１ × A2 三、主要实验材料、化学品和仪器 n n 化学品：活性红X-3B 10g/l 、 Na2CO3、 Na2SO4 仪器：722型分光光度计 四、实验步骤 n n 吸收光谱曲线的测定（用活性红X-3B） ①标准溶液的配制 ②吸收光谱曲线的测定 混合染料浓度的测定 ①绘制标准曲线 ②测定未知浓渡的染液绘制标准曲线 。在测定同一染 料的未知浓度时以其λmax处测得的吸光度，在标准 曲线上查得对应的染液浓度。 五、注意事项 n n 实验时使用蒸馏水作溶剂，空白溶液也 用蒸馏水 实验时一律使用B=1CM的比色皿，此时 A=KC 六、实验结果与讨论 n 根据所做图线分析染料浓度与吸光度之 间呈什么关系。若染料相对应浓度发生 变化，是否影响它们两者之间的关系。 氯浓度标准曲线绘制氯浓度标准曲线绘制 溶液的配制： 磷酸盐缓冲液： 无水磷酸氢二钠：24.0064g 无水磷酸氢二钾：45.9988g 乙二胺四乙酸二钠：0.8022g 碘酸钾储备液： 1.0055g 碘酸钾标准溶液： 碘酸钾储备液：10ml 碘化钾：1.0g 氢氧化钠： 80.0004g 硫酸溶液： 54.00ml 98%的浓硫酸 N,N-二乙基-1,4-苯二胺硫酸盐（DPD）： 98%浓硫酸 2.0ml 无水DPD硫酸盐：1.0998g EDTA二钠：0.2007g 所有溶液都配 制 成 1000ml的溶液 待测液的配制 序号 碘酸钾标准溶液/ml 硫酸溶液/ml 氢氧化钠溶液/ml 磷酸盐缓冲液/ml DPD试剂/ml 氯含量/ug 1 0 1 1 5 5 0 2 0.5 1 1 5 5 5 3 1 1 1 5 5 10 4 3 1 1 5 5 30 5 5 1 1 5 5 50 6 10 1 1 5 5 100 7 15 1 1 5 5 150 氯浓度标准曲线 铁标准曲线的绘制铁标准曲线的绘制方法 1.方法原理 亚铁在pH3~9之间的溶液中，可与邻菲啰啉生成很稳定的橙红色络合物。高铁离子可以通过还原剂还原成亚铁进行测定。测量波长在510nm处，用邻菲啰啉分光光度法可测量Fe2+、Fe3+及总铁含量。 2.方法适用范围 此方法适用于一般环境水和废水中铁的监测，最低检出浓度为0.03mg/L，测定上限为5.00 mg/L。对铁离子大于5.00 mg/L的水样，可适当稀释后再按照本方法进行测定。 3.仪器及试剂 3.1使用仪器 分光光度计，10mm比色皿 3.2试剂 3.2.1铁标准贮备溶液 称取0.7020g硫酸亚铁铵，溶于 (1+1)硫酸50mL中，转移至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液含铁浓度为100μg/mL。 3.2.2 铁标准使用液 准确移取标准贮备溶液25.00mL置于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。此溶液含铁浓度为25.0μg/mL。 3.2.3盐酸(ρ1.19g/mL)，(1+3)盐酸溶液 3.2.4盐酸羟胺溶液 盐酸羟胺溶液[ρ(NH2OH·HCl)=100g/L]：称取10g盐酸羟胺溶于水中，稀 释至100mL。 3.2.5 缓冲溶液：40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL。 3.2.6邻菲啰啉溶液： 邻菲啰啉溶液：称取0.5g邻菲啰啉溶于水中，加数滴盐酸帮助溶解，稀释至100mL。 3.2.7饱和乙酸钠溶液 4.铁标准曲线的绘制方法 4.1 标准曲线的绘制 将25.0μg/mL的铁标准溶液稀释5倍，变成5mg/L的铁标准溶液。再依次移取铁标准液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL置于50mL比色管中，加(1+3) 盐酸1mL，100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL，再加适量蒸馏水，在水浴中加热。然后冷却至室温，加一小片刚果红试纸，滴加饱和乙酸钠溶液至刚果红试纸刚刚变红，加入5mL缓冲溶液和邻菲啰啉溶液2mL，加水至标线，摇匀。显色15min后，用10mm比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度