基因工程及其应用讲课2 ppt课件.pptVIP

基因工程：即 。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 第一步： ？如何让大肠杆菌生产人胰岛素？ 4、其他 基因诊断：如用基因探针检测肝类病毒、诊断遗传病 基因治疗：把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。 转基因生物和转基因食品的安全性 你认为应该如何对待转基因生物和转基因食品的安全性问题？ 目前，大多数专家认为，已经投入商品化生产的转基因番茄、玉米等农产品都是安全的。迄今为止尚无食用转基因生物产品引起任何严重问题的科学报道。 转基因抗虫棉、耐贮藏番茄、抗病毒甜椒及基因工程疫苗等已获得生产应用安全证书。 * 基因工程及其应用 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 基因拼接技术或DNA重组技术 定向 遗传性状 获得新性状 受体细胞 目的基因 供体细胞 二、基因操作的工具 1、基因的 指“ 限制性核酸内切酶 ” 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割 特点: “ ” 这个特点说明了： 酶具有专一性 点击播放 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoliI内切酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 2：基因工程的 指“DNA连接酶” “ ” 作用： 连接“梯子”断口的“扶手”而非“梯子”中间的“踏板”。 其作用与限制性内切酶相反，作用点相同 DNA连接酶的作用过程 点击播放 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 DNA连接酶连接的是DNA骨架上的缺口，不是碱基间的氢键 3、基因的运输工具——运载体 　　运载体必须同时满足三个要求： ①具有一到多个限制酶的酶切位点,以便与外源基因连接; ②能进入受体细胞并在受体细胞内稳定存在并能复制、表达； ③具有标记基因,便于目的基因的筛选. 3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 标记基因，便于进行检测。 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　 提取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 ⑵人工合成基因法 DNA合成仪 有两种方法：　　　　　①逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下利用脱氧核苷酸合成DNA(基因)。　　②化学合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核糖核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 三、基因工程基本步骤： 第二步： 获取目的基因 目的基因与运载体结合 第三步： 将目的基因导入受体细胞 第四步: 目的基因的检测与鉴定 4、目的基因的表达和检测 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　 细菌和人是差异非常大的两种生物, 通过基因重组后,