一蛋白质1.pptVIP

2.由α-氨基参加的反应 与亚硝酸反应（α-氨基特有的反应）：Van Slyke氏氨基氮测定的理论基础； 与甲醛反应—甲醛滴定法； 与2，4-二硝基氟苯的反应：氨基酸+DNFB→DNP-氨基酸，鉴定氨基酸或蛋白质结构测定； 与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应----Edman法测氨基酸序列的原理； 酰化反应； 成盐反应 ； 形成西夫碱--羰胺反应（美拉德反应），食品褐变; 脱氨基反应—形成α-酮酸； 第31页/共45页 3.由α-羧基参与的反应 成盐反应 成酯反应 酰化反应 脱羧基反应 叠氮反应 第32页/共45页 4.由α-氨基和α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应 蛋白质中范含有α-氨基均与茚三酮在pH=5—6，t=100℃条件下反应。 应用小结： （1）定性作为分离氨基酸的层析图谱上的显色剂； （2）定量比色（570钠米）测定氨基酸的含量； （3）通过测定气体CO2的量间接测定氨基酸的含量（定量）； 成肽反应 第33页/共45页 四 .氨基酸的分离制备和用途 （一）氨基酸的分离 1.纸层析法 2.柱层析法 3.薄层层析法 4.电泳法 5.氨基酸自动分析仪 第34页/共45页 （二）氨基酸的制备 1.水解蛋白质法 2.人工合成法 3.微生物发酵法 （三）氨基酸的用途 1.科学实验 2.医药卫生 3.工农业 第35页/共45页 第三节 蛋白质的肽链结构 及高级结构 第36页/共45页 蛋白质的结构 一级结构：氨基酸的组成； 二级结构：多肽链本身的折叠方式； 三级结构：螺旋肽链结构盘绕、折叠成 复杂的空间结构； 四级结构：蛋白质亚基聚合成大分子蛋 白质的方式； 蛋白质的结构层次： 一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→四级结构 第37页/共45页 一 .蛋白质的肽链结构—一级结构 肽键：一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸分子的α-氨基缩合是区水而形成的酰胺键。 肽链，氨基酸残基 1.肽的一般概念 肽（peptide） ：是一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸分子的α-氨基之间脱去一分子水而通过肽键连接成的化合物。 第38页/共45页 N—末端：含有自由氨基的一端，书写用H表示； C—末端：含有自由羧基的一端，书写用OH表示； 第39页/共45页 2.肽的命名及表达式 例如：H.Tyr.Gly.Gly.Phe.Met.OH（甲硫氨酸型脑啡肽） （1）用结构式来表示； （2）用氨基酸中文名称的字头表示； （3）用氨基酸英文名称的三字符或单字符表示； 第40页/共45页 蛋白质与多肽的区别： 氨基酸残基数目？ 稳定的空间结构？ ＞50 —— 蛋白质 ＜50 —— 多肽 不稳定的空间结构 —— 多肽 稳定的空间结构 —— 蛋白质 第41页/共45页 3.生物活性肽 （1）谷胱甘肽GSH （2）神经肽—脑啡肽、内啡肽、强啡肽 H.Tyr.Gly.Gly.Phe.Met.OH（甲硫氨酸型脑啡肽） H.Tyr.Gly.Gly.Phe.Leu.OH（亮氨酸型脑啡肽） （3）抗菌肽 4.蛋白质的一级结构 蛋白质的一级结构指肽链中氨基酸的排列顺序和连接方式； 稳定一级结构的化学键：肽键； 第42页/共45页 5.一级结构的测定—氨基酸序列的自动程序测定 片段重叠法。其大体步骤为： 测定蛋白质中氨基酸组成； 进行末端分析，确定该氨基酸的肽链数目、N-末端、C-末端 （1）N-末端分析：DNFB法、PITC法（Edman法）、DNS法、氨肽酶法 （2）C-末端分析：肼解法、羧肽酶法； 肽链的拆分； 应用两种或两种以上的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段； 第43页/共45页 5.一级结构的测定—氨基酸序列的自动程序测定 应用两种或两种以上的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段； （1）溴化氰裂解法： （2）酶水解法： 胰蛋白酶：主要作用于碱性氨基酸（Lys、Arg）羧基形成的肽键； 胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶)：专一性水解疏水性氨基酸的羧基形成的肽键； 胃蛋白酶：断裂键两侧的氨基酸都是疏水性氨基酸，如Phe—Phe； 分离纯化部分降解的肽片段，分析每一片段的氨基酸组成和排列顺序；Edman降解法和酶水解法。 确定二硫键的位置； 根据重叠肽的氨基酸顺序，推断出完整肽的氨基酸顺序； 第44页/共45页 例题： 第一套肽段： QGS PS EQVE RLA HQWT； 第二套肽段： SEQ WTQG VERL APS HQ； N末端H肽段，C末端为S肽段； 则多肽链的顺序： HQWT QGS EQVE RLA PS； 第45页/共45页 * * * * * * * * *